[发明专利]红鱼眼组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域。更具体地说，本发明涉及一种红鱼眼组织培养快繁方法。

背景技术

红鱼眼(Phyllanthus reticulatus Poir)又名龙眼睛，烂头钵等，为分布于广东、广西等华南地区的一种大戟科、叶下珠属直立或攀援灌木。红鱼眼在广西壮族民间有较长的使用历史，为广西壮族民间重要药材，已被《广西壮族自治区壮药质量标准》(2008年版)收载，其具有祛风活血、散瘀消肿的功效，主治风湿关节炎痛，跌打损伤等痹证，并且在治疗糖尿病性腹泻、镇痛抗炎、抗肝炎病毒、体外抑菌、抗氧化等方面具有多种药理药效，且无明显毒性，具有重要的开发前景。现代研究表明，红鱼眼的药理药效以其主要活性成分为物质基础，红鱼眼茎中含有多肽、糖类、鞣质、有机酸、黄酮类、酚类、香豆素与内酯类、甾体或三萜类、皂苷、挥发油及油脂等。

尽管《广西中药材标准》(广西壮族自治区卫生厅编.广西科学技术出版社,1992.第1版)确认红鱼眼的原植物为龙眼睛(Phyllanthus reticulatus Poir)或无毛龙眼睛(Phyllanthus reticulatus Poir.var.glaber Muell.Arg)，但本专利所述红鱼眼为龙眼睛。

迄今为止，红鱼眼药材一直以采集利用野生自然资源为主。随着其药用价值、化学成分和应用范围等研究的深入和拓展，其需求量不断增加，野生自然资源受到过度采挖，储量急剧减少。因此，红鱼眼的人工种植逐渐受到重视。但至今尚未见有组织培养等繁殖相关的研究报道。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种红鱼眼组织培养快繁方法，其繁殖系数高，种苗质量好，能够快速繁殖出大量适合移栽的优良红鱼眼种苗、满足生产需要。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种红鱼眼组织培养快繁方法，包括如下步骤：

步骤一、外植体的选择与消毒：取红鱼眼健壮植株新萌发的嫩芽，将嫩芽依次用2％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴/100ml吐温-20的0.1％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得外植体；

步骤二、无菌试管苗获取：将步骤一得到的外植体置于超净工作台内，用解剖刀切成长1.0-1.5cm的带有一个腋芽的茎段，接种到MS诱导培养基中，于培养室内培养30天得无菌试管苗，其中，MS诱导培养基为：MS+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；

步骤三、增殖培养：将步骤二中得到的无菌试管苗接种到MS增殖培养基中，于培养室内培养30天得丛生芽，其中，MS增殖培养为：MS+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-0.5mg/LIBA+0.1-0.5mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；

步骤四、壮苗培养：将步骤三中得到的丛生芽接种到MS壮苗培养基中，于培养室内培养30天得健壮植株，其中，MS壮苗培养基为：MS+0.1-1.0mg/L2,4-D+0.5-1.5mg/L6-BA+0.1-1.0mg/LGA₃₊30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；

步骤五、生根培养：将步骤四中得到的健壮植株接种到MS生根培养基中，于培养室内培养30天得完整带根苗，其中，MS生根培养基为：MS+0.5-4.0mg/LNAA+0.5-3.0mg/L6-BA+10g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8；

步骤六、炼苗与移栽：将步骤五得到的完整带根苗在室温为25℃的室内打开组培瓶的瓶盖，瓶内加少量自来水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，并立即移栽到培养基质中培养30天，得大田移栽苗，其中，培养基质主要由蛭石和泥炭土按质量比1:1配制而成。

优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，所述MS诱导培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。

优选的是，所述的红鱼眼组织培养快繁方法，所述MS增殖培养为：MS+1.0mg/L6-BA+0.25mg/LIBA+0.25mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为5.8。