[发明专利]一种他克莫司8‑差向异构体的提纯方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种他克莫司8-差向异构体的提纯方法。

背景技术

他克莫司(Tacrolimus)又名FK506，是从链霉菌属(streptomyces tsukubaensis)中分离出的发酵产物，其化学结构属23元大环内酯类抗生素。为一种强力的新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2(L-2)的释放，全面抑制T淋巴细胞的作用，较环孢素(CsA)强100倍。近年来，作为肝、肾移植的一线用药，已在日本、美国等14个国家上市。临床实验表明，其在心、肺、肠、骨髓等移植中应用有很好的疗效。同时FK506在治疗特应性皮炎(AD)、系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也发挥着积极的作用。

他克莫司是一种新型强效的大环内酯类免疫抑制剂，1991年日本开发的名为普乐可复他克莫司胶囊剂和注射剂正式上市，用于原发性肝移植和肾移植的排斥反应治疗，后又被批准用于骨髓移植。目前他克莫司制剂已在中国、日本、美国等80多个国家上市，广泛应用于肝脏、胰脏、肾脏、心脏和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。1999年他克莫司软膏投放日本市场，用于治疗成人的特异性皮炎。

他克莫司通常从发酵液中分离提取得到。为了保证用药安全，在仿制药的研制和生产中，应当对药物杂质进行检测研究，从而提高药品质量，减少药物不良反应。由于他克莫司的生产主要是通过发酵，因而会存在很多的杂质，他克莫司8-差向异构体是发酵液中的主要杂质之一，化学式为C₄₄H₆₉NO₁₂。

目前，对采用发酵法制备他克莫司所制得的发酵液进行分离与纯化，以对他克莫司8-差向异构体进行分离成为了热门的研究课题。

中国发明专利CN101712685A等现有技术中所公开的他克莫司粗品纯化、精制等技术手段均无法解决对发酵液中他克莫司8-差向异构体进行分离以纯化他克莫司的技术问题。

有鉴于此，有必要对现有技术中对他克莫司粗品中分离他克莫司8-差向异构体的技术予以改进，以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于公开一种他克莫司8-差向异构体的提纯方法，用以实现对他克莫司粗品中的他克莫司8-差向异构体的有效分离，以提高他克莫司的纯度，以提高他克莫司的药品质量，并减少他克莫司所产生的不良反应。

为实现上述发明目的，本发明提供了一种他克莫司8-差向异构体的提纯方法，包括以下步骤：

(1)对他克莫司粗品使用有机溶剂进行溶解，滤膜过滤，得样品溶液；

(2)使用液相色谱柱进行分离纯化，得纯化液；

(3)对纯化液进行浓缩，冷却结晶，过滤得到他克莫司8-差向异构体粗品；

(4)将他克莫司8-差向异构体使用有机溶剂进行溶解，滤膜过滤，得他克莫司8-差向异构体纯品溶液；

(5)将他克莫司8-差向异构体纯品溶液浓缩后，冷却结晶，得他克莫司8-差向异构体纯品。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)与步骤(4)中的有机溶剂选自甲醇、乙醇或者乙腈中的一种或者两种以上任意比例的混合物。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)中的样品溶液的浓度为100～200mg/ml。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(2)中液相色谱柱的色谱条件为：

上样量：5～10‰；

流动相：35～45％的乙腈或35～45％的甲醇；

检测波长：220nm；

柱高：250～300mm；

流速：1350～2250ml/min；

填料：硅胶填料；其中，

所述硅胶填料的粒径10μm，碳含量4～7％，孔径

作为本发明的进一步改进，所述步骤(3)中的浓缩温度为30～40℃，结晶温度5～10℃。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(5)中的浓缩温度为30～40℃，结晶温度5～10℃。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)与步骤(4)中的滤膜选自陶瓷膜、聚四氟乙烯膜或者混合纤维微孔滤膜。

作为本发明的进一步改进，所述滤膜的过滤孔径为0.22μm。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：通过本发明揭示的一种他克莫司8-差向异构体的提纯方法，实现了对他克莫司粗品中的他克莫司8-差向异构体的有效分离，从而显著地提高了他克莫司的纯度，并减少了他克莫司所产生的不良反应。

附图说明