[发明专利]一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法

权利要求书

1.一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)组织培养：取白背三七叶片作为外植体，在无菌操作条件下，以叶片背面接于改良MS诱导培养基中，诱导分化得到愈伤组织，暗培养8-10天后，转入光照强度为1000-1500Lx培养室中，保持湿度80-85％，培养8-10天；继代培养2-3代后转接于分化培养基中，其中，分化培养基为0.2-0.4mg/L的萘乙酸、2-5％质量分数蔗糖的1/2MS培养基；1500-2000Lx光照强度下，培养20-30天，获得试管苗；

(2)水培：将试管苗接种于水培液中，其中，添加有40-45mg/L的MnSO₄、6.0-7.0mg/L的Zn SO₄；自然光下，培养8-10天，获得白背三七幼苗；

(3)大棚种植：按照草炭：蛭石：细砂按体积比(3-5):(0.5-1.5):(0.5-1.5)配制混合培养基；将白背三七幼苗种植于混合培养基中，自然光下，培养5-8天后，按照1500-2000kg/亩施入腐熟有机肥；4-5个月后收获白背三七茎叶；适时通风、灌溉；

(4)黄酮提取：将白背三七茎叶自然风干，剪切茎叶至2-3mm小块，粉碎过20-30目筛；按照料液比1:30-1:40比例添加50％-60％体积分数乙醇，浸泡90-120min，获得黄酮浸膏。

2.基于权利要求1所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：水培液中添加质量比(20-25)：(75-80)的Ca(NO₃)₂和(NH₄)₂SO₄，总氮素水平为0.25-0.35g/L。

3.基于权利要求1所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：水培液中添加28-32g/L的蔗糖作为碳源。

4.基于权利要求1所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：白背三七每年大棚种植时间为5月和10月，10月和次年5月收割。

5.基于权利要求4所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：步骤(4)之后，将黄酮浸膏以及浸渣一起放置于循环回流装置中进行回流提取，60-70℃条件下，回流提取3-4次，每次60-90min。

6.基于权利要求5所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：在回流提取次数间隔之间，将浸膏和浸渣放置于功率为360-480W微波下浸提1.5-2.5min；随后，将浸膏连同料渣一起进入下一次回流提取过程。

7.基于权利要求5或6所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：浸提结束后，将浸膏减压浓缩30-40min，保证含生药量≥0.1g/ml；采用聚酰胺树脂动态吸附浓缩液进行纯化，其中，洗脱液为70-75％质量浓度乙醇，加样、洗脱速度为2-4BV/h。

8.基于权利要求7所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：聚酰胺树脂纯化过程中，树脂药材比为1.5:1-2:1；树脂径高比为1:8-1:10。

9.基于权利要求8所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：上样pH保持为2.9-3.1；清洗pH保持为2-4。

10.基于权利要求1所述的一种用于提高白背三七中黄酮获得率的方法，其特征在于：改良MS诱导培养基添加有1.5-2.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤，0.1-0.3mg/L的萘乙酸,1.3-1.7mg/L的聚乙烯吡咯烷酮，pH5.5-6。