[发明专利]一种提高庆大霉素B发酵产量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种提高庆大霉素B发酵产量的方法。

背景技术

庆大霉素是一种氨基糖苷类抗生素,主要用于治疗细菌感染，尤其是革兰氏阴性菌引起的感染。庆大霉素能与细菌核糖体30s亚基结合，阻断细菌蛋白质合成。庆大霉素[Gentamicin，正泰霉素(gentamycin)]系从放线菌科单孢子属发酵培养液中提得，系碱性化合物，是常用的氨基糖苷类抗生素。

庆大霉素B是从绛红小单孢菌发酵产生的。野生型菌种庆大霉素B产量非常低。目前，庆大霉素B的菌种主要通过菌种突变筛选获得。庆大霉素B目前只能通过发酵法人工制得。但是在发酵法制备庆大霉素B的过程中通常是从庆大霉素的副产品中提取，因此存在组份多、含量低、分离难度较大且纯度较低的缺陷。同时，传统的发酵法制备庆大霉素B的工艺也存在发酵周期长，发酵法制备成本较高的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于公开一种提高庆大霉素B发酵产量的方法，以提高庆大霉素B的发酵产量，以降低庆大霉素B的制备成本，并提高其纯度。

为实现上述发明目的，本发明揭示了一种提高庆大霉素B发酵产量的方法，包括以下步骤：

步骤(1)：将庆大霉素B产生菌接种于斜面培养基，35～38℃下培养5～7天；

步骤(2)：挑选成熟的庆大霉素B产生菌斜面接种于摇瓶培养基，在摇床上进行培养，35～38℃，210～230rpm下培养45～55h，并接种于一级种子罐的一级种子培养基上，33～37℃下，培养45～55h，然后移种于二级种子罐的二级种子培养基上，33～37℃下，培养20～28h；

步骤(3)：接种于发酵罐的发酵培养基上，33～37℃下进行发酵，罐压0.03～0.05Mpa，通气量为1:0.5～1:1.5vvm；发酵进行至20～30h补加无机盐溶液，发酵进行至40～50h再次补加无机盐溶液，发酵进行至60～70h进行补料培养，通过改变转速的方式维持发酵罐内的溶解氧浓度保持在设定值之上，对发酵液采用上柱解析、浓缩冻干，制得庆大霉素B。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(1)中的斜面培养基的组成为：玉米淀粉1.8～2.2g/L，KNO₃0.05～0.15g/L，NaCl0.04～0.06g/L，MgSO₄0.03～0.07g/L，K₂HPO₄0.02～0.04g/L，小麦粉1.8～2.2g/L，CaCO₃0.09～0.11g/L，琼脂1.7～2.3g/L，余量为水，所述斜面培养基pH为7。

作为本发明的进一步改进，所述步骤(2)中的摇瓶培养基的组成为：淀粉1.8～2.2g/L，黄豆饼粉1.8～2.2g/L，葡萄糖0.4～0.6g/L，玉米粉0.3～0.7g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，KNO₃0.04～0.06g/L，K₂HPO₄0.01～0.03g/L，CaCO₃0.3～0.5g/L，余量为水，所述摇瓶培养基pH为7。

作为本发明的进一步改进，所述摇瓶培养基的接种量为10～15％。

作为本发明的进一步改进，所述一级种子培养基的组成为：淀粉0.8～1.2g/L，黄豆饼粉1.4～1.6g/L，玉米粉0.8～1.2g/L，KNO₃0.04～0.06g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，聚醚0.03～0.05g/L，CaCO₃0.3～0.5g/L，余量为水，所述一级种子培养基pH为8.0～8.4；

所述二级种子培养基的组成为：淀粉1.8～2.2g/L，黄豆饼粉1.4～1.6g/L，玉米粉0.4～0.6g/L，葡萄糖0.4～0.6g/L，蛋白胨0.1～0.3g/L，KNO₃0.05～0.15g/L，聚醚0.03～0.05g/L，余量为水，所述二级种子培养基pH为8.0～8.4。