[发明专利]一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种饲料有效磷仿生评定法，特别是涉及一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法。

背景技术

磷(Phosphorus)是动植物体内的必需矿物元素，是继蛋白质和能量之外的第三昂贵的饲料原料。客观、准确评定各种饲料原料的生物学效价是动物营养需要量研究、优化饲料配方的基础，是提高畜禽日粮利用率、降低日粮成本及养殖业节能减排的决策依据。饲料磷生物学效价的评定方法主要有体内法(in vivo)和体外法(in vitro)。体内法耗资、费力、费时，系统误差和偶然误差影响因素多，不同时空条件下的测值重演性、可比性差不能满足研究和生产应用所需。而体外法具有快速、简便、费用低等优点，各国营养学家都有诸多研究报道。近年来，饲料磷的体外评定技术在国际上越来越受到关注，从而推动了相关研究的快速发展，其中以Zyla等(1995)和Liu等(1997，1998)所建立的方法应用最为广泛。然而这些体外法大都以三角瓶、试管、透析管等简单实验器材为基础，由于大量的人工操作引入的系统误差所得结果可重复性和精度较差。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种畜禽饲料有效性与安全性评价过程中饲料仿生消化后所释放的磷的含量测定方法。

在系统总结生长猪消化道主要消化酶变异规律的基础上，设计出模拟杜×长×大三元杂交生长猪在典型饲粮条件下的酶谱与水解环境，开发了可全自动模拟猪体内消化过程的单胃动物仿生消化系统(SDS-3)。模拟动物消化道内环境，饲料在单胃动物仿生消化系统完成模拟30kg生长猪的体内消化过程，水解产物通过钒钼酸铵测定消化液中磷的总量。同时，测定试样的干物质含量。以计算每克绝干饲料克释放的无机磷总量作为饲料有效磷的总量值，有效磷占总磷的百分比为磷的消化率。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法，采用单胃动物仿生消化系统运行模拟消化过程，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品处理：样品采集后将样品粉碎至过孔径0.30mm试验筛；

2)胃模拟消化：饲料样品置于玻璃模拟消化管中，取胃缓冲液和模拟胃液加入消化管中，将消化管安装在带有搅拌电机的单胃动物方式消化系统的立式模块上，将立式专用模块架置于单胃动物仿生消化系统中，设定相应参数进行胃模拟消化；

3)小肠模拟消化：胃模拟消化结束时，小肠缓冲液注入消化管中，然后通过蠕动泵将自动入模拟消化管中，设定小肠阶段模拟消化的参数进行小肠消化；

4)消化残渣的处理：消化结束后，将玻璃消化管内的消化液用水冲洗干净无损失地转移到容量瓶中，用水准确定容至刻度，摇匀备用，取消化液与三氯乙酸以6:4比例混合后静置10min，离心10min，上清液备用；同样方法制备样品空白上清液；

5)制作磷含量标准曲线；

6)消化液中磷含量测定，移取上清液至试管中，加入钒钼酸铵显色剂摇匀，室温下放置10min，用比色皿在波长415nm处测定吸光值；准确移取样品空白上清液至试管中，加入钒钼酸铵显色剂，摇匀，室温下放置10min，用比色皿在波长415nm处测定吸光值；

7)实验管OD₄₁₅值与空白管OD₄₁₅值之差，代入标准曲线中计算无机磷浓度；

8)计算有效磷含量X1，

有效磷含量

式中：

X₁为有效磷含量，％；

a为标准曲线回归系数；

b为标准曲线回归常数；

OD₁—测定管的吸光度值；

OD₂—无饲料空白管的吸光度值；

m—饲料样品重量(g)；

DM为饲料样品的干物质含量；

9)磷的消化率

X1—有效磷含量(％)；

X—饲料中总磷含量(％)。

P—磷的消化率。

胃阶段模拟消化的参数为：温度39℃，蠕动泵转速188rpm/min，消化时间4h；小肠阶段模拟消化的参数为：温度39℃，蠕动泵转速188rpm/min，小肠消化时间为16h。