[发明专利]一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法

权利要求书

1.一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法，采用单胃动物仿生消化系统运行模拟消化过程，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品处理：样品采集后将样品粉碎至过孔径0.30mm试验筛；

2)胃模拟消化：饲料样品置于玻璃模拟消化管中，取胃缓冲液和模拟胃液加入消化管中，将消化管安装在带有搅拌电机的单胃动物方式消化系统的立式模块上，将立式专用模块架置于单胃动物仿生消化系统中，设定相应参数进行胃模拟消化；

3)小肠模拟消化：胃模拟消化结束时，小肠缓冲液注入消化管中，然后通过蠕动泵将自动入模拟消化管中，设定小肠阶段模拟消化的参数进行小肠消化；

4)消化残渣的处理：消化结束后，将玻璃消化管内的消化液用水冲洗干净无损失地转移到容量瓶中，用水准确定容至刻度，摇匀备用，取消化液与三氯乙酸以6:4比例混合后静置10min，离心10min，上清液备用；同样方法制备样品空白上清液；

5)制作磷含量标准曲线；

6)消化液中磷含量测定，移取上清液至试管中，加入钒钼酸铵显色剂摇匀，室温下放置10min，用比色皿在波长415nm处测定吸光值；准确移取样品空白上清液至试管中，加入钒钼酸铵显色剂，摇匀，室温下放置10min，用比色皿在波长415nm处测定吸光值；

7)实验管OD₄₁₅值与空白管OD₄₁₅值之差，代入标准曲线中计算无机磷浓度；

8)计算有效磷含量X1，

有效磷含量

式中：

X₁为有效磷含量，％；

a为标准曲线回归系数；

b为标准曲线回归常数；

OD₁—测定管的吸光度值；

OD₂—无饲料空白管的吸光度值；

m—饲料样品重量(g)；

DM为饲料样品的干物质含量；

9)磷的消化率

P(%)=X1X]]>

X1—有效磷含量(％)；

X—饲料中总磷含量(％)；

P—磷的消化率。

2.根据权利要求1所述的一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法，其特征在于，阶段模拟消化的参数为：温度39℃，蠕动泵转速188rpm/min，消化时间4h；小肠阶段模拟消化的参数为：温度39℃，蠕动泵转速188rpm/min，小肠消化时间为16h。

3.根据权利要求1所述的一种饲料中有效磷含量的仿生消化测定方法，其特征在于，所述胃缓冲液的配制方法为：称取14.705g二水合柠檬酸三钠，2.59g氯化钠，0.25g氯化钾放入500mL烧杯中，加入400ml去离子水溶解，并用6mol/L盐酸或氢氧化钠在39℃下调节溶液的pH至2.50，冷却后转入500mL容量瓶，并用去离子水定容；所述小肠缓冲液为：称取18.165gTris，2.6g氢氧化钠放入500ml烧杯中，加去离子水溶解，转入500ml容量瓶并定容至刻度；模拟胃液：称取147.5KU的胃蛋白酶溶解于100ml pH 2.50的胃缓冲液中，缓慢搅拌30min；模拟小肠液为：称取猪液素0.81g溶解于20ml去离子水中，磁力搅拌溶解30min，作为模拟肠液。