[发明专利]一种海水蚶科贝类血细胞采集和超微结构观察的方法

权利要求书

1.一种蚶科贝类血细胞的超微结构观察的方法,它包括以下步骤：

（1）蚶科贝类血液的采集 把暂养的蚶科贝类从海水中取出，平置于阴凉处，静置，蚶科贝类左右两壳张口0.5～1cm宽时，将一个有一定硬度的棒物体搁在蚶科贝类张开双壳腹缘的中间位置，维持双壳开启状态，又不伤及软体部；根据实验需求选用提前灭菌的枪头采血,采血部位选用靠近贝壳边缘的闭壳肌中的血窦，摁下移液器吸取按钮的同时用枪头尖端轻轻扎入闭壳肌中的血窦中，慢慢松开移液器按钮吸取血窦中的血液，直至移液器按钮全部松开，把所吸取的血液迅速滴入固定液或抗凝剂中,在一个采血部位重复吸取2～3次血液，采血完毕后,被取血的蚶科贝类先放置回原处阴干0.5～1小时，待取血口闭合后，再放回洁净的海水中继续暂养，供继续实验；

（2）超微结构观察 把所获得的蚶科贝类血液立刻用固定液固定，固定液配方为：50%戊二醛10mL，多聚甲醛20g，Tris 3.029g，溶于500mL无菌过滤海水；待血细胞沉降稳定后，用移液器吸去细胞层上面的上清，更换1～2次固定液，置4℃冰箱中保存；

血细胞经固定之后在离心管中自然沉降并分层，细胞层底层超过十分之九为红细胞层，颜色暗红，上清和细胞层之间有一薄层细胞颜色偏浅黄色，包括白细胞、含淋巴细胞和血栓细胞；用移液器在不同层中吸取所需血细胞类型；分离的血细胞分为扫描电镜组和透射电镜组，扫描电镜组经酒精系列脱水，乙酸异戊酯置换酒精2次，零界点干燥仪干燥，离子溅射仪镀金后，于扫描电镜下观察拍照；透射电镜组酒精系列脱水，环氧树脂Epon812包埋，超薄切片机切片，切片厚度50nm，经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色，在透射电镜下观察拍照。