[发明专利]一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括有如下序列的引物：

2.如权利要求1所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括特异探针，所述的特异探针序列如下：

3.如权利要求1所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括报告探针，所述的报告探针序列如下：

4.一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：首先进行PCR反应，实现扩增；再进行多重OLA反应，标记和连接；然后进行杂交反应，最后进行基因型的分析。

5.如权利要求4所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，PCR反应体系如下：2x qiagen Hotstar MM 5ul,primer mix 1ul，DNA样本2ul,灭菌水2ul；PCR反应条件为95℃、15min，进行30个循环的94℃,30秒，60℃,30秒，72℃,30秒；72℃、7分钟，4℃维持。

6.如权利要求4所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，多重OLA反应如下：配制2xOLA master mix，将OLA master mix与PCR反应产物混合，混匀后进行连接反应。

7.如权利要求6所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，配制2xOLA master mix包括有：10x Taq Ligase buffer 2ul,40000U/ml的Taq DNA Ligase 0.25ul，野生型探针mix 1ul，突变型探针mix 2ul，去离子水4.75ul。

8.如权利要求6所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，连接反应条件如下：96℃2min,30个循环的94℃15s,37℃1min；4℃维持。

9.如权利要求4所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，杂交反应的过程如下：选择相应的报告探针的磁珠，重悬，然后将每种磁珠混合，稀释最多至100u颗/ul，用2X Tm hybridization buffer，混合后加入磁珠混合物至每孔中，添加1-5ul OLA reaction和25ul dH₂O至每个孔，进行PCR反应：96℃90s,37℃30min，吸走上清，用1x Tm hybridization buffer重悬磁珠，吸磁30-60s，再次吸走上清，重复用1x Tm hybridization buffer重悬磁珠，吸磁30-60s，第三次吸走上清，用1x Tm hybridization buffer重悬磁珠，在37℃温育15min，加入50ul反应产物至LUMINEX中分析。

10.如权利要求4所述的一种检测硫嘌呤药物SNP位点基因型的方法，其特征在于，杂交反应的过程如下：1、选择磁珠，并重悬；2、将每种磁珠混合，并稀释至100u颗/ul，用2X Tm hybridization buffer，振荡混合；3、加入磁珠混合物至每孔中；4、添加样品至每孔中；5、进行PCR反应：96℃90s，37℃30min；6、准备6ug/ml SAPE在1x hybridization buffer；7、添加100ul SAPEmix，混匀；8、37℃温育15min；9、加入100ul至37℃的luminex中分析。