[发明专利]生物样本制备方法及其应用以及代谢物定性定量分析方法

说明书

本发明提供了用于在对来自生物体的生物体样本的中的代谢物进行气相色谱仪和质谱仪联用检测分析前，对生物样本进行处理得到前处理样本的生物样本前处理方法及其在代谢物检测中的应用、以及相应的代谢物检测分析方法，其中的生物样本前处理方法包括以下步骤：步骤1，提取处理；步骤2，衍生反应，采用辅助试剂以及衍生试剂对提取生物样本进行衍生反应得到衍生生物样本；步骤3，标准化并去杂，其中，辅助试剂中至少包括强碱性溶液和低温醇类有机溶剂，在步骤1中，先采用强碱性溶液再采用低温醇类有机溶剂对生物样本进行连续地提取处理。

技术领域

本发明属于化学领域，具体涉及一种用于在对来自生物体的生物体样本的中的代谢物进行气相色谱和质谱联用仪检测分析前，对生物样本进行处理得到前处理样本的生物样本制备方法及其在代谢物定性定量分析中的应用、以及相应的代谢物定性定量分析方法。

背景技术

生物体中具有大量的各种途径产生的代谢物，一些是来自生物体本身代谢产生的，一些是生物体和生物体中的微生物群共同代谢产生的，还有一些是生物体中的微生物群自身代谢产生的。各个途径产生的代谢物发挥各自的功能，相互协同作用于生物体的整体机能，所以如何检测到更多的代谢物以进一步地分析，成为当今代谢物分析的重要研究目标。

而各种途径产生的代谢物浓度差异巨大，理化性质上也千差万别，特别是人体(生物体)的肠道菌在生物体(宿主)中产生的代谢物、以及肠道菌与生物体(宿主)共同代谢产生的共代谢物，包括短链脂肪酸、氨基酸、苯甲酰和苯基衍生物、吲哚衍生物、脂类、胆汁酸、胆碱、维生素以及多胺类等，它们有截然不同的物理和化学性质，因此如何用尽可能少的平台同时测定尽可能多的代谢物极具挑战。

目前，尚未有方法能够同时检测上述提及到短链脂肪酸、氨基酸、苯甲酰和苯基衍生物、吲哚衍生物、脂类、胆汁酸、胆碱、维生素以及多胺类等多种小分子代谢物。

发明内容

本发明提供一种用于在对来自生物体的生物体样本的中的代谢物进行气相色谱和质谱联用仪检测分析前，对生物样本进行处理得到前处理样本的生物样本制备方法及其在代谢物定性定量分析中的应用、以及相应的代谢物定性定量分析方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了一种生物样本制备方法，用于在对来自生物体的生物样本进行前处理得到能用于代谢物进行气相色谱和质谱联用仪检测分析的前处理样本，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，提取处理，对预定量的生物样本进行代谢物的提取得到提取生物样本；步骤2，衍生反应，采用辅助试剂以及衍生试剂对提取生物样本进行衍生反应得到衍生生物样本；步骤3，标准化并去杂，向衍生样本中加入由多种直链烷烃标准品混合得到的保留指数标准物质混合物后，进行去杂得到前处理样本，其中，辅助试剂中至少包括强碱性溶液和低温醇类有机溶剂，在步骤1中，先采用强碱性溶液再采用低温醇类有机溶剂对生物样本进行连续地提取处理。

本发明提供的生物样本制备方法，还具有这样的特征：其中，强碱性溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或氨水溶液中的一种。

本发明提供的生物样本制备方法，还具有这样的特征：其中，强碱溶液的浓度为1M，步骤1具体为：步骤1.1，第一次提取，取预定量的生物样本于离心管中，将强碱性溶液按每1mg生物样本加入30μL的比例加入到生物样本中进行匀浆，然后在温度为4℃、离心力为16000g的条件下离心20min，取离心得到的第一次上清液装入进样小瓶中；步骤1.2，第二次提取，向取第一次上清液后剩余的残留物中按每1mg生物样本加入20μL的比例加入低温醇类有机溶剂清洗后，再次匀浆和离心，取离心得到的第二次上清液加入进样小瓶中与第一次上清液合并得到提取生物样本。

本发明提供的生物样本制备方法，还具有这样的特征：其中，预定量为1-500mg。

本发明提供的生物样本制备方法，还具有这样的特征：其中，预定量为100-500mg。