[发明专利]生物样本制备方法及其应用以及代谢物定性定量分析方法

权利要求书

1.一种生物样本制备方法，用于在对来自生物体的生物样本进行前处理得到能用于代谢物进行气相色谱和质谱联用仪检测分析的前处理样本，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，提取处理，对预定量的所述生物样本进行代谢物的提取得到提取生物样本；

步骤2，衍生反应，采用辅助试剂以及衍生试剂对所述提取生物样本进行衍生反应得到衍生生物样本；

步骤3，标准化并去杂，向所述衍生样本中加入由多种直链烷烃标准品混合得到的保留指数标准物质混合物后，进行去杂得到所述前处理样本，

其中，所述辅助试剂中至少包括强碱性溶液和低温醇类有机溶剂，在步骤1中，先采用所述强碱性溶液再采用所述低温醇类有机溶剂对所述生物样本进行连续地提取处理。

2.根据权利要求1所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述强碱性溶液为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或氨水溶液中的一种。

3.根据权利要求2所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述强碱溶液的浓度为1M，所述步骤1具体为：

步骤1.1，第一次提取，取预定量的所述生物样本于离心管中，将所述强碱溶液溶液按每1mg所述生物样本加入30μL的比例加入到所述生物样本中进行匀浆，然后在温度为4℃、离心力为16000g的条件下离心20min，取离心得到的第一次上清液装入进样小瓶中；

步骤1.2，第二次提取，向取第一次上清液后剩余的残留物中按每1mg所述生物样本加入20μL的比例加入所述低温醇类有机溶剂清洗后，再次匀浆和离心，取离心得到的第二次上清液加入所述进样小瓶中与所述第一次上清液合并得到所述提取生物样本。

4.根据权利要求1至3任意一项所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述预定量为1-500mg。

5.根据权利要求4所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述预定量为100-500mg。

6.根据权利要求4所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述预定量为1-50mg。

7.根据权利要求1所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述辅助试剂中还包括吡啶溶液，所述衍生试剂为氯甲酸甲酯试剂，

所述步骤2具体为：

取所述提取生物样本置于4℃托盘中，将所述吡啶溶液和所述氯甲酸甲酯试剂按体积比为1.7:1加入，在2,500-3,000rpm的振动条件下振摇30s得到所述衍生生物样本。

8.根据权利要求1至3以及7中任意一项所述的生物样本前处理方法，其特征在于：

其中，所述生物样本为所述生物体的粪便、鼻分泌物、阴道分泌物或肠内容物中的一种多种。

9.根据权利要求1所述的生物样本制备方法，其特征在于：

步骤3具体为：

步骤3.1，将保留指数标准物质混合物加入到氯仿溶液中得到含保留指数标准品氯仿溶液；

步骤3.2，将所述将含保留指数标准品氯仿溶液按与所述衍生生物样本的体积比为第一预定体积比的比例加入到所述衍生生物样本中，在2,500-3,000rpm的振动条件下，振摇10s，得到标混样本；

步骤3.3，按与所述标混样本的体积比为第二预定体积比的比例加入浓度为50mM的NaHCO3溶液加入到所述标混样本中,在2,500-3,000rpm的振动条件下振摇10s，在温度为4℃、离心力为2000g的条件下离心10min以分层得到分层溶液；

步骤3.4，将所述分层溶液中位于分层底部的氯仿层转入含100mg无水硫酸钠的气相样品瓶中作为所述前处理生物样本。

10.根据权利要求9所述的生物样本制备方法，其特征在于：

其中，所述第一预定体积比为1:1。