[发明专利]一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽及其应用

说明书

本发明公开了一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，本发明还公开了降血脂五肽在制备降血脂保健品中的应用。有益效果为：本发明所提供的鮸鱼鱼肉降血脂五肽在基因表达和蛋白表达都能下调成脂基因，上调促进脂肪酸氧化基因，具有很好的降脂活性；以五肽为保健品的活性成分，能够降低心绞痛、心肌梗死、脑血栓、高血压和动脉粥样硬化症状的发生，提高人们的健康水平。

技术领域

本发明涉及到降血脂寡肽，尤其是涉及一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽及其应用。

背景技术

血脂是血浆中的中性脂肪和类脂的总称，广泛存在于人体中，它们是生命细胞的基础代谢必需物质。血脂过高具有很大危险性，容易引起心绞痛、心肌梗死、脑血栓、高血压和动脉粥样硬化等，严重影响现代人的身体健康。特别是老龄化社会的到来，患高血脂症的人群逐渐增多。因此，降血脂功效成分筛选和降血脂药物开发的相关研究备受学术界关注。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，该五肽能够下调成脂基因，上调促进脂肪酸氧化基因，具有很好的降脂活性。

本发明的另一目的在于将源于鮸鱼鱼肉的五肽用于制备降血脂保健品中的用途，以五肽为活性成分，能够降低心绞痛、心肌梗死、脑血栓、高血压和动脉粥样硬化症状的发生，提高人们的健康水平。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽在制备降血脂保健品中的应用，该五肽的氨基酸序列为：IRWWW，ESI-MS测定分子量为846.00Da。五肽在基因表达和蛋白表达都能下调成脂基因，上调促进脂肪酸氧化基因，具有很好的降脂活性。

作为优选，源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽的制备方法包括以下步骤：

鮸鱼鱼肉预处理：鮸鱼去鱼皮和鱼骨，鱼肉匀浆至糊状后，按料液比1g:4～6mL加入乙酸乙酯溶液，搅拌脱脂20～24h，过滤，干燥，得脱脂鮸鱼鱼肉；

鮸鱼鱼肉的酶解：取脱脂鮸鱼鱼肉，按料液比1g:5～7mL加入蒸馏水，调节pH值至6.5～7.5，加入鱼肉重量1.0%～1.5%木瓜蛋白酶，45～55℃酶解3～5h，在90～100℃持续10min灭酶活，样品降温至50℃，调节pH值至8.5～10.0，加入碱性蛋白酶1.0%～2.0%，反应3～5h，在90～100℃下持续10min灭酶活，冷却至常温，12000rmp离心20min，收集上清液，得鮸鱼鱼肉酶解液，该条件下，酶活力高，酶解反应速度快，且使鮸鱼鱼肉得到了充分利用；

鮸鱼鱼肉降血脂寡肽的制备：将鮸鱼鱼肉酶解液经截留分子量为1kDa、3kDa和10kDa的超滤膜进行分级，收集截留分子量小于1kDa组分，得到超滤酶解液，将超滤酶解液按照体积比加入到装有8～10倍D101大孔树脂的层析柱中，用3～5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5～8倍柱体积的60%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液在50℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物，多肽混合物依次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，得到鮸鱼鱼肉降血脂寡肽。该条件下，所获得的五肽纯度高，品质好，为五肽的应用研究提供了良好的条件。

作为优选，离子交换树脂层析的具体过程为：将上述多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为45～50mg/mL的溶液，加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱，依次用蒸馏水、0.1、0.5和1 mol/L的NaCl溶液洗脱，收集1 mol/LnaCl洗脱组分，即为离子交换层析酶解物，该过程操作简单，重复性好，且洗脱范围广，可根据实际情况进行放大条件实现工业化生产；

作为优选，凝胶柱层析的具体过程为：将上述离子交换层析酶解物溶于双蒸水配成浓度为15～20mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶Sephadex G-15柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据280nm下的吸光度制作凝胶层析色谱图，收集峰2，即为凝胶层析酶解物，该过程利用不同分子量大小的物质在层析柱中流动速度的不同实现了物质的分离，操作简单，且不影响酶解物的品质；