[发明专利]一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽及其应用

权利要求书

1.一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述五肽的氨基酸序列为：IRWWW，ESI-MS测定分子量为846.00Da。

2.根据权利要求1所述的一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述五肽的制备方法包括以下步骤：

1)鮸鱼鱼肉预处理：去皮骨，匀浆，按料液比1g:4～6mL加入乙酸乙酯溶液，搅拌脱脂20～24h，经过滤干燥得脱脂鮸鱼鱼肉；

2)鮸鱼鱼肉的酶解：取脱脂鮸鱼鱼肉，按料液比1g:5～7mL加入蒸馏水，调节pH值至6.5～7.5，加入鱼肉重量1.0%～1.5%木瓜蛋白酶，45～55℃酶解3～5h，在90～100℃持续10min灭酶活，样品降温至50℃，调节pH值至8.5～10.0，加入碱性蛋白酶，反应3～5h，在90～100℃下持续10min灭酶活，冷却至常温，12000rmp离心20min，收集上清液，得鮸鱼鱼肉酶解液；

3)鮸鱼鱼肉降血脂寡肽的制备：将鮸鱼鱼肉酶解液经截留分子量为1kDa、3kDa和10kDa的超滤膜进行分级，收集截留分子量小于1kDa组分，得到超滤酶解液，将超滤酶解液按照体积比加入到装有8～10倍D101大孔树脂的层析柱中，用3～5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5～8倍柱体积的60%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物，多肽混合物依次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，得到鮸鱼鱼肉降血脂寡肽。

3.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述步骤3)中离子交换树脂层析的具体过程为：将上述多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为45～50mg/mL的溶液，加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱，依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.5mol/L和1mol/L的NaCl溶液洗脱，收集1mol/LNaCl洗脱组分，即为离子交换层析酶解物。

4.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述步骤3)中凝胶柱层析的具体过程为：将上述离子交换层析酶解物溶于双蒸水配成浓度为15～20mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶Sephadex G-15柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据280nm下的吸光度制作凝胶层析色谱图，收集峰2，即为凝胶层析酶解物。

5.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述步骤3)中反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化的具体过程为：将上述凝胶层析酶解物用双蒸水配成80～100μg/mL的溶液，利用RP-HPLC进行纯化得五肽。

6.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述步骤1)中碱性蛋白酶的加入量为鱼肉重量的1.0%～2.0%。

7.根据权利要求5所述的一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽，其特征在于：所述RP-HPLC条件为：进样量10～15μL；色谱柱Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：40%乙腈；洗脱速度0.8～1.0mL/min；紫外检测波长280nm。

8.一种源于鮸鱼鱼肉的降血脂五肽的应用，其特征在于将五肽用于制备降血脂保健品中的用途。