[发明专利]一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗氧化肽，具体涉及一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽。

背景技术

生物活性肽（bioactive peptides）是20个天然氨基酸以不同排列方式和组合构成的包括二肽和复杂的环形、线形结构的不同肽类的总称，它是对生物体代谢活动和生理调节有益或具有生理功能的肽类化合物。

氨基酸通过脱水缩和形成酰胺键，多个氨基酸相连接形成多肽，每个生物活性多肽由于其在结构组成上的不同，导致其生物活性也有所差别，例如谷胱甘肽能够阻止细胞膜中某些蛋白质不被氧化，阿片肽能够促进机体摄入脂肪和蛋白质，胸腺肽能够激活机体免疫系统而增强免疫能力，降血压肽能够通过抑制血管紧张素II的生成从而达到降低血压的作用。近年来以水产品及其加工副产物制备抗氧化肽成为研究热点。

鮸鱼（Miichthys miiuy），又称米鱼、鳘鱼，属鲈形目石首鱼科。鮸鱼肉质鲜美，含有丰富的维生素及钙、磷、铁等微量元素，是传统的滋补食材，有养血、止血、补肾固精、润肺健脾和消炎等功效。但目前以鮸鱼鱼肉为原料，利用酶解工艺制备抗氧化肽未见报道。但是，申请人以鮸鱼鱼肉为原料，首次利用酶解技术制备鮸鱼鱼肉抗氧化肽，而以酶解产物为材料制备高活性抗氧化肽及其应用更是未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种能够清除自由基和保护细胞免受氧化损伤作用的鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收，可作为药品、保健食品和食品的安全添加剂。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，抗氧化肽为五肽化合物，抗氧化肽的氨基酸序列为Phe-Trp-Lys-Val-Val (FWKVV)，ESI-MS测定分子量为677.84Da。

一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其制备方法包括下述步骤：

1）鮸鱼鱼肉预处理：去除鮸鱼鱼皮和鱼骨，取鱼肉匀浆至糊状后，按料液比1g:4～6mL加入乙酸乙酯溶液，搅拌脱脂20～26h，过滤，干燥，得脱脂鮸鱼鱼肉，该步骤下鱼肉中脂肪脱除率高，不仅可除去非胶原蛋白的杂蛋白，且胶原蛋白的流失量小，对鱼肉中其他成分的性能无影响；

2）鮸鱼鱼肉的酶解：取脱脂鮸鱼鱼肉，按料液比1g:4～7mL加入蒸馏水。调节pH值至6.5～7.5，加入鱼肉重量1.0～1.5%木瓜蛋白酶，45～55℃酶解3～5h，于90～100℃进行10～15min灭酶；酶液降温至50～60℃时，调节pH值至8.5～10.0，加入鱼肉重量1.0～2.0%碱性蛋白酶，反应3～5h，于90～100℃进行10～15min灭酶，冷却至常温，在11000～15000rmp下离心17～24min，收集上清液，即得鮸鱼鱼肉酶解液，经过两次加酶酶解，鱼肉中蛋白质的转化率高，活性多肽的提取彻底，且操作条件控制合理，所得的活性多肽的品质高；

3）鮸鱼鱼肉抗氧化肽的制备：将鮸鱼鱼肉酶解液经截留分子量为1kDa、3kDa和10kDa的超滤膜进行分级，收集截留分子量小于1kDa组分，得到超滤酶解液。将超滤酶解液按照体积比加入到装有8～10倍D101大孔树脂的层析柱中，用3～5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5～8倍柱体积的60%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物，多肽混合物依次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，得到鮸鱼鱼肉抗氧化肽，该制备步骤所得的抗氧化肽纯度高，且安全无毒副作用、抗氧化活性强、易于消化吸收。

作为优选，步骤1）中的鮸鱼为Miichthys miiuy。

作为优选，步骤3）的离子交换树脂层析、凝胶柱层析和RP-HPLC纯化的具体过程为：

离子交换树脂层析：将上述多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为45~50mg/mL的溶液，加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱，依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.5mol/L和1 mol/L的NaCl溶液洗脱，收集自由基清除活性最强组分，即为离子交换层析酶解物，该方法分离净化效果好，操作简单，条件控制的自由度高，同样适用于工业化生产；