[发明专利]一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽

权利要求书

1.一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的抗氧化肽为五肽化合物，所述的抗氧化肽的氨基酸序列为Phe-Trp-Lys-Val-Val (FWKVV)，所述的抗氧化肽的ESI-MS测定分子量为677.84Da。

2.根据权利要求1所述的一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的鮸鱼鱼肉抗氧化肽的制备方法，包括下述步骤：

1）鮸鱼鱼肉预处理：去除鮸鱼鱼皮和鱼骨，取鱼肉匀浆至糊状后，按料液比1g:4～6mL加入乙酸乙酯溶液，搅拌脱脂20～26 h，过滤，干燥，得脱脂鮸鱼鱼肉；

2）鮸鱼鱼肉的酶解：取脱脂鮸鱼鱼肉，按料液比1g:4～7mL加入蒸馏水，调节pH值至6.5～7.5，加入鱼肉重量1.0～1.5%木瓜蛋白酶，45～55℃酶解3～5h，于90～100℃进行10～15min灭酶；酶液降温至50～60℃时，调节pH值至8.5～10.0，加入鱼肉重量1.0～2.0%碱性蛋白酶，反应3～5h，于90～100℃进行10～15min灭酶，冷却至常温，在11000～15000rmp下离心17～24min，收集上清液，即得鮸鱼鱼肉酶解液；

3）鮸鱼鱼肉抗氧化肽的制备：将鮸鱼鱼肉酶解液经截留分子量为1kDa、3kDa和10kDa的超滤膜进行分级，收集截留分子量小于1kDa组分，得到超滤酶解液，将超滤酶解液按照体积比加入到装有8～10倍D101大孔树脂的层析柱中，用3～5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5～8倍柱体积的60%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物，多肽混合物依次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，得到鮸鱼鱼肉抗氧化肽。

3. 根据权利要求2所述的一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的步骤3）的离子交换树脂层析的具体过程为：将步骤3）的多肽混合物溶于双蒸水配成浓度为45~50 mg/mL的溶液，加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱，依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.5mol/L和1 mol/L的NaCl溶液洗脱，收集自由基清除活性最强组分，即为离子交换层析酶解物。

4. 根据权利要求2所述的一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的步骤3）的凝胶柱层析的具体过程为：将离子交换树脂层析所得的离子交换层析酶解物溶于双蒸水配成浓度为15~20mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶Sephadex G-15柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，收集具有最高自由基清除活性的峰为凝胶层析酶解物。

5. 根据权利要求2所述的一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的步骤3）的RP-HPLC纯化的具体过程为：将凝胶柱层析所得的凝胶层析酶解物用双蒸水配成80~100μg/mL的溶液，利用RP-HPLC进行纯化，根据对自由基的清除活性得1个高抗氧化活性多肽Phe-Trp-Lys-Val-Val (FWKVV)。

6. 根据权利要求2所述的一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的步骤3）中的RP-HPLC纯化条件为：进样量为10~15μL；色谱柱为Kromasil C₁₈（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为40%乙腈；洗脱速度为0.8~1.0mL/min；紫外检测波长为280nm。

7.根据权利要求1所述的一种鮸鱼鱼肉抗氧化肽，其特征在于：所述的抗氧化肽用于药品、保健食品和食品的用途。