[发明专利]一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽及其应用

权利要求书

1.一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽，其特征在于：所述源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽的氨基酸序列为：Gly-Ile-Glu-Trp-Ala(GIEWA)，分子量为574.64Da。

2.根据权利要求1所述的一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽，其特征在于：所述的源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽的制备方法为：

预处理：鮸鱼鱼鳔经清洗、匀浆至糊状后，按照料液比1g:10-15mL加入NaOH溶液浸泡，过滤，用蒸馏水洗至中性，按照料液比1g：5-8mL加入异丙醇溶液脱脂，过滤，固体物用蒸馏水将异丙醇冲洗干净，干燥，得脱脂鮸鱼鱼鳔；

酶解：取脱脂鮸鱼鱼鳔，按料液比1g:5-8mL加入蒸馏水，调节pH值，加入碱性蛋白酶，酶解，酶解结束后于90-100℃灭酶10-15分钟，冷却至室温后于12000-12500rmp离心15-20分钟，收集上清液，得鮸鱼鱼鳔酶解液；

提取：将鮸鱼鱼鳔酶解液经截留分子量为10kDa和3kDa的超滤膜进行分级，收集截留分子量小于3kDa的组分，得到超滤酶解液；将超滤酶解液依次经离子交换树脂层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，得到鮸鱼鱼鳔降血脂五肽。

3.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽的制备方法，其特征在于：所述的预处理步骤中NaOH溶液的浓度为0.1-0.12mol/L，浸泡温度为4-6℃，浸泡时间为12-15小时，异丙醇溶液的质量分数为10-12%，脱脂时间为36-48小时。

4.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽及其应用，其特征在于：所述酶解步骤中的碱性蛋白酶的加入量为鱼鳔重量的2-3%，碱性蛋白酶的酶活力≥2.0×10⁵U/g，酶解温度为50-60℃，pH为9-10，酶解时间为3-4小时。

5.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽及其应用，其特征在于：所述的提取步骤中的离子交换树脂层析为：将超滤酶解液用双蒸水配成浓度为45-55mg/mL的溶液，3-4℃、12000-12500r/min离心15-20分钟，去除不溶性杂质；取上清液加入到DEAE-52阴离子交换树脂层析柱，依次用蒸馏水、0.1mol/L、0.5mol/L和1mol/L的NaCl溶液洗脱，收集0.5mol/LNaCl洗脱组分，即为离子交换层析酶解物。

6.根据权利要求2所述的一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽及其应用，其特征在于：所述提取步骤中的凝胶柱层析为：将离子交换层析酶解物溶于双蒸水配成浓度为45-55mg/mL的溶液，3-4℃、12000-12500r/min离心15-20分钟，去除不溶性杂质；取上清液经过葡聚糖凝胶SephadexG-25柱层析分离，用超纯水进行洗脱，根据280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，降血脂活性最强组分为凝胶层析酶解物。

7. 根据权利要求1所述的一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽及其应用，其特征在于：所述提取步骤中的RP-HPLC纯化为：将凝胶层析酶解物用双蒸水配成80-100μg/mL的溶液，利用RP-HPLC进行纯化， RP-HPLC纯化条件为：进样量为10-15μL；色谱柱KromasilC₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为40%乙腈；洗脱速度为0.8-1.0mL/min；紫外检测波长为280nm；根据各组分降血脂活性筛选获得降血脂五肽Gly-Ile-Glu-Trp-Ala(GIEWA)。

8.一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽的应用，其特征在于：所述的降血脂五肽作为降血脂活性成分、保健产品和食品添加剂的应用。