[发明专利]一种以活性形式表达的谷氨酰胺转氨酶的突变体

权利要求书

1.一种谷氨酰胺转氨酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.编码权利要求1所述突变体的核苷酸序列。

3.表达权利要求1所述突变体的重组菌。

4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，以解脂耶氏酵母po1h为宿主。

5.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，构建方法是：将茂源链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶基因和吸水链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶酶原区hpro基因融合后与载体连接，将重组质粒线性化后转到宿主菌中，所述茂源链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2，所述吸水链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶酶原区hpro的氨基酸序列如SEQID NO.3所示。

6.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，构建方法是：

(1)将茂源链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶基因和吸水链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶酶原区hpro基因融合后与载体连接，构建质粒pINA1297/hpro-mTG，所述茂源链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2，所述吸水链霉菌来源的谷氨酰胺转氨酶酶原区hpro的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

(2)重组质粒pINA1297/hpro-mTG线性化后，转化到解脂耶氏酵母po1h，经营养缺陷型培养基YNB筛选后，获得重组菌po1h/hpro-mTG。

7.一种表达活性谷氨酰胺转氨酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌共同表达蛋白酶TAMEP和谷氨酰胺转氨酶hpro-mTG，所述蛋白酶TAMEP的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述谷氨酰胺转氨酶hpro-mTG的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

8.根据权利要求7所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌的构建方法：首先构建蛋白酶TAMEP的表达载体pINA1297/HT，将质粒线性化后转化到重组菌po1h/hpro-mTG中，经营养缺陷型培养基YNB筛选后，得到表达活性谷氨酰胺转氨酶的重组菌po1h/HM+HT。

9.应用权利要求3-8任一所述重组菌发酵生产谷氨酰胺转氨酶突变体的方法，其特征在于，所述方法为：

(1)摇瓶发酵：将重组菌接种于YPD液体培养基中，25-30℃，180-230rpm培养20-27h，按8-12％的接种量转接于解脂耶氏酵母发酵培养基中，25-30℃，180-230rpm摇瓶培养4-6d；

(2)发酵罐发酵：将重组菌接种于YPD液体培养基中，28℃，200rpm培养24h后，种子液以10％的接种量接种至发酵罐中，控制温度28℃，搅拌转速为600rpm，通气量为2vvm，当溶氧开始反弹且60％时，开始流加50％(W/V)甘油120mL，调节转速使溶氧30％，发酵120h。

10.根据权利要求9所述方法得到的谷氨酰胺转氨酶在医药、化妆品生产以及皮革加工方面的应用。