[发明专利]一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型的方法及试剂盒在审
申请号: | 201711009881.3 | 申请日: | 2017-10-25 |
公开(公告)号: | CN108004305A | 公开(公告)日: | 2018-05-08 |
发明(设计)人: | 杜予和;黄尚春 | 申请(专利权)人: | 广州和康医疗技术有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12N15/11 |
代理公司: | 深圳市千纳专利代理有限公司 44218 | 代理人: | 袁燕清 |
地址: | 510000 广东省广州市萝岗*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 蝶呤 疗效 snp 基因型 方法 试剂盒 | ||
1.一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包括有如下序列的引物:
2.如权利要求1所述的一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒还包括特异探针,所述的特异探针序列如下:
3.如权利要求1所述的检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒还包括报告探针,所述的报告探针序列如下:
4.一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型检测的方法,其特征在于,所述的方法包括如下的步骤:首先进行PCR反应,实现扩增;再进行多重OLA反应,标记和连接;然后进行杂交反应,最后进行基因型的分析。
5.如权利要求4所述的一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型检测的方法,其特征在于,PCR反应体系如下:2x qiagen Hotstar MM 5ul,primer mix 1ul,DNA样本2ul,灭菌水2ul;PCR反应条件为95℃、15min,进行30个循环的94℃,30秒,60℃,30秒,72℃,30秒;72℃、7分钟,4℃维持。
6.如权利要求4所述的一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型检测的方法,其特征在于,多重OLA反应如下:配制2xOLA master mix,将OLA master mix与PCR反应产物混合,混匀后进行连接反应。
7.如权利要求6所述的一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型检测的方法,其特征在于,配制2xOLA master mix包括有:10x Taq Ligase buffer 2ul,40000U/ml的Taq DNALigase 0.25ul,野生型探针mix 1ul,突变型探针mix 2ul,去离子水4.75ul。
8.如权利要求6所述的一种检测甲氨蝶呤疗效的SNP位点基因型检测的方法,其特征在于,连接反应条件如下:96℃2min,30个循环的94℃15s,37℃1min;4℃维持。
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