[发明专利]一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，特别是涉及一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，所制备的组合物经临床实验发现具有抗肿瘤的功效。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1、将脐带组织块用含有双抗的磷酸缓冲溶液清洗后，剪碎成为1-1.5mm³的脐带组织块；

S2、将脐带组织块加入胶原酶Ⅰ/胶原酶P混合溶液中，震荡消化，取出脐带组织块清洗后加入胰蛋白酶溶液中继续消化；

取消化后的脐带组织块过筛，收集滤液后离心，沉淀加入间充质干细胞无血清培养基制成间充质干细胞悬液；

S3、间充质干细胞体外培养；

S4、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，过滤上清除菌；

S5、加入生理盐水继续培养12-24小时，破碎细胞后离心，收集上清过滤得到干细胞提取液；

S6、取灵芝切片、干燥后，粉碎至40目，取灵芝粉末溶于乙醇溶液中，加热后微波处理，回流提取得到灵芝提取液；

S7、将S5中制备的干细胞提取液与S6中制备的灵芝提取液按照1：5-8的质量比进行混合得到组合物。

进一步地，所述含有双抗的磷酸缓冲溶液中青霉素和链霉素浓度均为100u/mL。

进一步地，所述S2中取采用含有10％胎牛血清的DMEM培养基终止消化。

进一步地，所述Ⅰ型胶原酶/胶原酶P混合溶液以质量比2：1混合。

进一步地，所述S3中间充质干细胞的培养方法为，将间充质干细胞悬液接种于无菌培养皿中，培养24h后第一次换液并去除贴壁细胞，之后每隔2d换液一次，当细胞生长至85％汇合度后以1：2比例进行传代培养。

进一步地，所述灵芝粉末与乙醇溶液固液比为1：20-25。

进一步地，所述S6中微波处理15-20min，功率为550-750w。

进一步地，一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物，灵芝活性物质与人源干细胞活性因子按照1：5-8的质量比混合后得到。

本发明具有以下有益效果：

灵芝具有补气安神、止咳平喘、延年益寿的功效，用于治疗眩晕不眠、心悸气短、神经衰弱、虚劳咳喘等症状，本发明将人源与植物源干细胞性质生物活性提取物进行配伍，在发挥各自优势的基础上协同作用，使之发挥更大的综合效应，所制备的组合物经临床实验发现具有抗肿瘤的功效。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

具体实施方式

本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明为一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，该方法具体步骤如下：

实施例1

S1、将脐带组织块用含有双抗的磷酸缓冲溶液清洗后，剪碎成为1mm³的脐带组织块，所述含有双抗的磷酸缓冲溶液中青霉素和链霉素浓度均为100u/mL；

S2、将脐带组织块加入胶原酶Ⅰ/胶原酶P混合溶液中，37℃120rpm震荡消化40min，取出脐带组织块用磷酸缓冲溶液清洗后加入1.25g/L胰蛋白酶溶液中，37℃继续消化15min，取出后加入含有10％胎牛血清的DMEM培养基终止消化；

其中，所述Ⅰ型胶原酶/胶原酶P混合溶液以质量比2：1混合；