[发明专利]一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法

权利要求书

1.一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、将脐带组织块用含有双抗的磷酸缓冲溶液清洗后，剪碎成为1-1.5mm³的脐带组织块；

S2、将脐带组织块加入胶原酶Ⅰ/胶原酶P混合溶液中，震荡消化，取出脐带组织块清洗后加入胰蛋白酶溶液中继续消化；

取消化后的脐带组织块过筛，收集滤液后离心，沉淀加入间充质干细胞无血清培养基制成间充质干细胞悬液；

S3、间充质干细胞体外培养；

S4、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，过滤上清除菌；

S5、加入生理盐水继续培养12-24小时，破碎细胞后离心，收集上清过滤得到干细胞提取液；

S6、取灵芝切片、干燥后，粉碎至40目，取灵芝粉末溶于乙醇溶液中，加热后微波处理，回流提取得到灵芝提取液；

S7、将S5中制备的干细胞提取液与S6中制备的灵芝提取液按照1：5-8的质量比进行混合得到组合物。

2.根据权利要求1所述的一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，其特征在于：所述含有双抗的磷酸缓冲溶液中青霉素和链霉素浓度均为100u/mL。

3.根据权利要求1所述的一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，其特征在于：所述S2中取采用含有10％胎牛血清的DMEM培养基终止消化。

4.根据权利要求1所述的一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，其特征在于：所述Ⅰ型胶原酶/胶原酶P混合溶液以质量比2：1混合。

5.根据权利要求1所述的一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，其特征在于：所述S3中间充质干细胞的培养方法为，将间充质干细胞悬液接种于无菌培养皿中，培养24h后第一次换液并去除贴壁细胞，之后每隔2d换液一次，当细胞生长至85％汇合度后以1：2比例进行传代培养。

6.根据权利要求1所述的一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，其特征在于：所述灵芝粉末与乙醇溶液固液比为1：20-25。

7.根据权利要求1所述的一种具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物及其制备方法，其特征在于：所述S6中微波处理15-20min，功率为550-750w。

8.一种如权利要求1所述的具有保肝功效的灵芝活性物质与人源干细胞活性因子的组合物，其特征在于，灵芝活性物质与人源干细胞活性因子按照1：5-8的质量比混合后得到。