[发明专利]用于检测乙肝癌变易感基因多态性的引物对及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外核酸检测技术领域，尤其涉及一种用于检测乙肝癌变易感基因多态性的引物对及试剂盒。

背景技术

肝癌是全世界致死率高居第三的恶性肿瘤，也是中国常见的一种恶性疾病。全球每年约有70万人死于肝癌。肝癌中肝细胞肝癌(Hepato Cellular Carcinoma，HCC)最常见，国际癌症研究机构2000年的调查显示，HCC患者中80％与异性肝炎病毒和丙型肝炎病毒有关。病史调查表明，中国的肝癌病人中80％以上都有乙肝病史。根据卫生部发布的数据，中国目前总计有9300万乙肝病人，占全世界乙肝患者总数的三分之一以上。

我国1992年普及乙肝疫苗注射后，肝癌发病率已有所下降。但在之前出生的人，约8％～9％呈乙肝表面抗原(HBsAg)阳性。因此，中国大陆在未来40～50年肝细胞癌仍将是一个重要的公共健康问题。由于原发性肝癌(HCC)患者出现临床表现常属疾病晚期，死亡率高，因此，筛查高危因素用于临床预测乙肝病毒感染的患者并发HCC的风险，有利于疾病的早期发现和治疗。

主要组织相容性复合体(MHC)，参与免疫反应的调节，尤其是T细胞介导的细胞免疫反应。人类MHC主要为人白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen，HLA)，位于人的6号染色体，分为Ⅰ类和Ⅱ类。MHCⅡ类分子只是在少数细胞中表达，如树突状细胞、B淋巴细胞等，其中最具代表性的为HLA-DR和HLA-DQ抗原。HLA-DR，-DQ通过MHCⅡ类分子限制的T细胞对外来抗原的识别，在介导淋巴细胞活化、抗原递呈等机体免疫应答和免疫调节过程中发挥重要的作用。

全基因组关联研究表明，HLA-DQ基因簇上的SNPs与肝硬化、HBV和HCV引起的HCC风险性相关，尤其是位于与HCC具有生物学相关性的HLA-DQB1基因和HLA-DQA2基因之间的rs9275319位点。

信号转导和激活因子(STAT)家族是近年来发现的一类转录因子，包括STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6。STAT家族是介导细胞因子、生长因子信号通路上启动蛋白转录的重要转录因子，它们在许多信号通路的细胞分子事件中都起到重要作用，例如细胞分化、细胞增殖和存活。

STAT4位于染色体2q32.2-2q32.3，是T细胞，NK细胞，树突状细胞，核巨噬细胞等免疫调控细胞内IL-12/STAT4/IFN-γ信号传导途径的关键组成元件，是IL-12诱导免疫调控细胞产生IFN-γ的关键调控因子，介导IL-12的免疫反应与调节T细胞的分化。国外研究证实，STAT4基因多态性参与多种自身免疫性疾病的发生。

STAT4通过信号传导，使白细胞介素12诱导产生IFN-γ。IFN-γ是一种多效性细胞因子，在宿主防御中具有重要的作用。由于STAT4基因多态性，激活的IFN-γ可能会降低它的抗病毒和抗肿瘤活性，通过研究证实：STAT4中的G等位基因的单核苷酸多态性与乙肝癌变的高风险有关。

2012年12月，复旦大学遗传学研究所、遗传工程国家重点实验室教授余龙，在《自然·遗传学》(Nature Genetics)杂志上发表的《Genetic variants in STAT4 and HLA-DQ genes confer risk of hepatitis B virus–related hepatocellular carcinoma》，确定人的STAT4和HLA-DQ基因是乙肝患者罹患肝癌的关键易感基因。余龙课题组联系了海内外30个课题组，66位学者开展协作攻关，收集了国内7个地区、总计11799例乙型肝炎患者的血细胞DNA样本。包括5480例有乙肝病变的肝癌病例和6319例有乙肝病史但无肝癌的对照者。运用全基因组关联分析技术比对分析了这两组人群的全基因组序列中近73万个单核苷酸多态位点的等位基因频率，最终在STAT4基因和HLA-DQ基因簇上发现了与乙肝癌变风险显著关联的易感基因位点。

HLA-DQ基因和STAT4基因是乙肝患者罹患肝癌的关键易感基因，为人类进一步研究如何降低肝癌发病风险、治疗乙肝和肝癌指出了新的方向。通过检测HLA-DQ基因和STAT4基因的分型，筛查肝癌的易感人群，从而提前对易感人群进行相应的综合干预和预防措施，降低肝癌发病风险。因此进行HLA-DQ和STAT4位点的基因分型检测对于预防乙肝癌变有着非常重要的意义。