[发明专利]一种治疗复发性HSK的双基因靶向治疗系统

说明书

本发明公开了一种双基因靶向治疗系统rdHSV1‑IFNγ‑siRNA的构建方法，具体方法为：删除单纯疱疹病毒HSV1中ICP4、ICP34.5和ICP27基因，突变VP16基因，得到复制缺陷型载体rdHSV1；对LAT基因靶序列进行筛选、靶位证实，做出siRNA核苷酸序列，其序列由序列表中的SEQ ID NO:2所示；将IFNγ基因序列与siRNA序列分别连入穿梭质粒，与复制缺陷型载体rdHSV1进行同源重组，获得双基因靶向治疗系统rdHSV1‑IFNγ‑siRNA；本发明针对HSK目前亟待解决的病毒潜伏感染和复发问题，利用目前最先进的HSV病毒载体作为工具，建立了一种针对HSV病毒潜伏标志基因LAT基因和活化病毒的双基因靶向疗法，特异性定位到病毒潜伏部位进行基因沉默和干预治疗。

【技术领域】

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种治疗复发性HSK的双基因靶向治疗系统。

【背景技术】

单纯疱疹病毒性角膜炎(Herpes Simplex Keratitis,HSK)是最常见的病毒性角膜炎，在角膜病中发病率和致盲率均居首位。该病由于单纯疱疹病毒(Herpes SimplexVirus,HSV)潜伏感染于人三叉神经节及角膜组织，容易复发，重症病例迁延不愈，最终失明。单纯疱疹病毒(HSV)对人的感染性很强。20岁以上的成年人中，血清抗体阳性率达90％，原发感染仅见于对本病毒无免疫力的儿童，多为6个月至5岁的小儿。原发感染后病毒终生潜伏于体内待机再发。继发感染多见于5岁以上儿童和成人。一些非特异性刺激如感冒、发热、疟疾、感情刺激、月经、日晒、应用糖皮质激素、退翳及创伤等都可能成为复发的诱因。目前该病发病机制不明，传统药物治疗副作用大，机体易产生耐药，手术治疗也难以解决复发，使其成为眼科世界性难题。

【发明内容】

本发明的目的是提供一种治疗复发性HSK的双基因靶向治疗系统，以解决单纯疱疹病毒性角膜炎易复发、难治愈的问题。

本发明采用以下技术方案：一种双基因靶向治疗系统rdHSV1-IFNγ-siRNA，至少包含复制缺陷型载体rdHSV1、来自于人血液淋巴细胞的IFNγ基因序列、siRNA核苷酸序列。

进一步地，复制缺陷型载体rdHSV1通过将单纯疱疹病毒HSV1中的ICP4、ICP34.5和ICP27基因删除，突变VP16基因而得到。

进一步地，IFNγ基因序列由序列表中的SEQ ID NO:1所示。

进一步地，siRNA核苷酸序列由序列表中的SEQ ID NO:2所示。

还包括一种复制缺陷型载体rdHSV1，通过将单纯疱疹病毒HSV1中的ICP4、ICP34.5和ICP27基因删除，突变VP16基因而得到。

还包括一种来自于人血液淋巴细胞的IFNγ基因序列，其序列由序列表中的SEQID NO:1所示：

SEQ ID NO：1