[发明专利]一种浓缩脂肪干细胞培养上清制剂、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于医疗卫生技术领域，具体涉及一种浓缩脂肪干细胞培养上清制剂、其制备方法及应用。

背景技术

由火焰、热液、电等物理因素和强酸、强碱等化学物质引起的组织损伤统称为烧烫伤，它是日常生活与工作中的常见病。烫伤严重时会造成深部组织坏死，如果处理不当，严重会发生溃烂，长时间都无法愈合。

烫伤创面愈合过程主要包括炎症反应期、细胞增殖期及结构重塑期。组织损伤后，炎性渗出后逐渐出现成纤维细胞和毛细血管内皮细胞的增殖，随着肉芽组织的形成，新生上皮向创面中心推进，逐渐填补创口覆盖创面直至创面愈合。

目前针对烫伤后的处理手段主要包括：物理降温、创面消毒与灭菌和使用抗生素预防感染。显然，这些处理手段仅属于急性期的预防措施，并不能对烫伤后创面修复产生直接作用。更有甚者，处理不当会加重伤情。例如，以流水冲洗降温可能导致的不良反应包括：由流水细菌造成并发感染、因流水作用使伤口开裂或皮肤皱缩，愈合后遗留疤痕、因体温降低过多导致休克等。

现有医疗手段也有尝试采用干细胞对创面进行修复治疗，但是现有这种治疗方式需要保持干细胞正常生长，因此常常需要现用现配置，很难保质，使用非常受限。

综上所述，现有对于烫伤创面的修复手段不合理，不良反应多，操作繁琐，应用受限。因此一种能够对皮肤烫伤创面修复具有良好效果且使用方便的治疗制剂亟待开发研究。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供一种浓缩脂肪干细胞培养上清制剂，本发明目的是通过大量的细胞因子的生物活性强烈促进有丝分裂和参与干细胞诱导分化，继而参与组织细胞的生长、再生和重建，迅速完成对于创面的修复。本发明中还相对应的提供的所述浓缩脂肪干细胞培养上清制剂的制备方法以及应用。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂，所述浓缩脂肪干细胞培养上清制剂主要由脂肪组织来源的间充质干细胞培养的细胞培养液的上清液浓缩而得。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂，优选的方案是，所述浓缩脂肪干细胞培养上清制剂还添加有hrEGF、VEGF和bFGF。进一步优选的，hrEGF、VEGF和bFGF添加后的浓度各自分别依次为0.08～0.15μg/mL、0.05～0.11μg/mL和0.01～0.10μg/mL。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂，优选的方案是，所述浓缩的倍数为3～6倍，所述浓缩的方法为透析法。

根据本发明的具体实施方式，本发明的另一目的是提供所述浓缩脂肪干细胞培养上清制剂的制备方法，包括以下步骤：S1取脂肪细胞，使用生理盐水进行清洗，然后加入等体积的胶原酶消化，消化后离心，去上清液；S2置入脂肪干细胞无血清培养基，重悬后转入细胞培养瓶进行培育；S3收集传代前的上清液，将上清液浓缩后制成细胞培养液，添加hrEGF、VEGF和bFGF即得。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂的制备方法，优选的方案是，S1中，所述胶原酶为I型胶原酶，所述消化的时间为30～60min，所述I型胶原酶的浓度为0.1％～0.5％。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂的制备方法，优选的方案是，S1中，所述离心具体为：将消化后的脂肪细胞用直径为70μm的滤膜过滤，再在2000rpm/min的条件下离心5～10min。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂的制备方法，优选的方案是，S2中，所述脂肪干细胞无血清培养基中添加有hrEGF、VEGF和bFGF，hrEGF、VEGF和bFGF添加后的培养基中的浓度分别为0.08～0.15μg/mL、0.05～0.11μg/mL和0.01～0.10μg/mL。

根据本发明的具体实施方式的浓缩脂肪干细胞培养上清制剂的制备方法，优选的方案是，S3中，浓缩后经直径0.22μm滤膜过滤除菌，添加hrEGF、VEGF和bFGF后所得浓缩脂肪干细胞培养上清制剂中hrEGF、VEGF和bFGF的浓度分别为0.08～0.15μg/mL、0.05～0.11μg/mL和0.01～0.10μg/mL。

根据本发明的具体实施方式，本发明的再一目的是提供所述浓缩脂肪干细胞培养上清制剂在制备治疗烫伤的药物中的应用。优选的，所述烫伤包括但不限制于火焰、热液、电等物理因素以及强酸和强碱等化学物质所引起的组织损伤。所述药物包括但不限制于液剂、粉剂、雾剂、丸剂和贴敷药膏等剂型。