[发明专利]基于反向荧光增强的高灵敏可视化双模态急性心肌梗塞免疫层析试纸条制备和检测方法

说明书

基于反向荧光增强的高灵敏可视化双模态急性心肌梗塞免疫层析试纸条制备和检测方法。本发明利用磁纳米颗粒在特定条件下可以淬灭荧光信号的反应机理，结合超顺磁性纳米颗粒免疫层析试纸条检测结果可视化及荧光检测灵敏度高的优势，拟构建一种可视化的荧光定量检测免疫层析试纸条，通过对淬灭荧光信号的反应机理，消除背景荧光的干扰，并通过荧光的信号强度及磁纳米颗粒的聚集显色，达到裸眼条件下快速定性，暗场测试下精准定量的宽范围双模态检测，搭建一种基于反向荧光增强高灵敏可视化双模态免疫层析试纸条检测技术，该方法操作简单，无需专业培训，方便快捷，结果直观，其快速高灵敏检测可实现AMI早期诊断的准确性及社区筛查的普适性。

技术领域

本发明涉及医药诊断技术领域，更具体的是涉及一种基于反向荧光增强高灵敏可视化双模态免疫层析试纸条的制备和检测方法。

背景技术

急性心肌梗塞(AMI)是最严重的急性心血管疾病之一，发病急，致死率高，其死亡率随着年龄的增长而增加。全国统计资料显示在40岁后，急性心肌梗塞的死亡率急剧上升，老年人心肌梗死的患病率也日趋升高，成为老年人常见的心脏病，其死亡率和患病率逐年上升的主要原因有：首次发病，病人往往对疾病认识不足，未能及时就诊；老年人前驱症状多不典型，易误诊为其他系统疾病，且有不少为无痛者，无痛者的比例常随年龄增长而增加，大于80岁高龄患者，无痛性心肌梗死发病率高达60.69％；并发症、夹杂症较多，在急性期，并发症占90.3％，更增加了症状的不典型和复杂性。据统计约40％的患者死于发病后4小时内，因此及早做出正确的诊断，研究一种敏感性较高的诊断方法对于早期诊断，降低AMI患者死亡率，改善预后至关重要。

目前，心肌标志物是快速检测急性心肌梗死的有效方法,可作为诊断急性心肌梗死的必要条件。其研究有助于尽早发现病情并且将理想的心肌梗塞标志物用于治疗疗效评价和预后评估，有很高的临床应用价值。肌钙蛋白cTnI存在于心肌细胞中，由于它们在正常血清中含量极微，在AMI发病6～8小时明显增高，释放到血循环中，血中浓度迅速升高，持续10～14天，其含量的变化与治疗效果密切相关，是诊断AMI和监测术后、观察疗效的最佳指标，我们可根据cTnI测定值大小判断心肌损伤的程度并进行危险分层,判断愈后,以及进一步采取治疗措施。因此将cTnI作为心肌标志物对高危人群进行筛查，对AMI的早期诊断、病情发展和预后监测等工作将有极大帮助。综上所述，对生物体内的特异标志物实现高灵敏度的检测是生命科学领域研究的一项重要课题，发展一种新的高灵敏的检测方法也是目前研究者们努力的目标。

免疫层析试纸条是一种操作简单，无需专业培训，方便快捷，结果直观的免疫学检测技术，在现代POCT中占有重要地位。目前试纸条技术已经比较成熟，在诊断领域得到迅速推广，已逐渐发展为检验医学的一种新模式并成功应用于多种生物小分子、重金属和肿瘤标志物的检测。如传统的胶体金试纸条通过金纳米颗粒显示出一定的颜色从而实现特异性检测的免疫分析，此方法虽然检测结果肉眼可见，但无法完成精准定量检测；荧光免疫层析试纸条检测技术是胶体金免疫层析试纸条技术后为实现定量检测兴起的新技术，但在研究过程中发现，对于血清中的痕量标志物的精准定量，现有荧光免疫层析检测技术仍难以满足其诊断要求，其原因主要在于：1)在信号报告上，信号强度仍不够高；2)在信噪比上，背景噪音干扰严重。3)舍弃了胶体金试纸条快速显色检测的优势。因此，如何建立一种高灵敏可视化的AMI标志物免疫层析技术成为目前AMI早诊的关键问题。磁性纳米微球是一种通过修饰表面包被有某种化学基团或者免疫配基的球形纳米微粒其与靶物质的结合特异性良好，由于这种球形磁性纳米微粒的大小和形状具有良好的均一性，因此可使靶物质迅速且有效地结合到磁性微球上。此外，磁纳米颗粒可作为一种荧光淬灭剂，对荧光染料具有较强的淬灭性能。因此，结合超顺磁性纳米颗粒试纸条的可视化检测特性以及荧光检测灵敏度高的优势，利用磁纳米颗粒在特定条件下淬灭荧光信号的反应机理和磁纳米颗粒免疫层析试纸条检测结果可视化，拟构建一种可视化的荧光定量检测免疫层析试纸条，通过对淬灭荧光信号的反应机理，消除背景荧光的干扰，并通过荧光的信号强度及磁纳米颗粒的聚集显色，达到裸眼条件下快速定性，暗场测试下精准定量的宽范围双模态检测，来提高AMI早期诊断的准确性及社区筛查的普适性。