[发明专利]基于反向荧光增强的高灵敏可视化双模态急性心肌梗塞免疫层析试纸条制备和检测方法

权利要求书

1.基于反向荧光增强的高灵敏可视化双模态急性心肌梗塞免疫层析试纸条的制备方法，其特征步骤如下：

1)磁纳米颗粒免疫探针的制备将2，5-呋喃二酮与1-十八烯的聚合物改性后的水溶性磁纳米颗粒，急性心肌梗塞(AMI)的相关标志物的标记抗体cTnI，EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)溶解于反应溶液，室温悬培，活化磁纳米颗粒表面的羧基，离心，洗涤，最后偶联上抗体的磁纳米颗粒用BSA封闭过夜；

2)试纸条的组装试纸条依次是由样品垫，表面涂有急性心肌梗塞特异性单克隆抗体标记的磁纳米颗粒的结合垫，在硝酸纤维素膜的特定区域喷有用荧光素Cy5标记的cTnI包被抗体即检测线，喷有IgG抗体的区域即质控线，末端的吸水垫以及塑料底板构成。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是磁纳米颗粒，高分子2，5-呋喃二酮与1-十八烯的聚合物的质量分数配比是1：4-8，以及EDC与磁纳米颗粒用量的质量分数配比是1:40-80。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是BSA封闭液用量为1％～3％。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是将样品垫浸入含Tween-20(聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯)的Tris-HCL缓冲液中静置5-10min，然后放入37℃恒温干燥箱中至完全干燥，获得预处理的样品垫，封袋置于4℃保存。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是结合垫的处理液是蔗糖、牛血清白蛋白BSA、聚乙二醇PEG、聚氧乙烯山梨醇单月桂酸酯Tween-20的混合溶液。

6.基于权利要求1的反向荧光增强的高灵敏可视化双模态急性心肌梗塞免疫层析试纸条的检测方法，其特征是定性检测方法是：根据双抗夹心免疫反应的原理，将上述抗体标记的高分子改性后的水溶性磁纳米颗粒和待检物的混合物加入样品池，免疫反应2-3min,当待测样本中含有目标抗原时，复合物将同时被T线和C线捕获，通过磁性纳米颗粒聚集显色，直接肉眼定性检测结果为阳性；反之，检测样本中不含目标抗原时，则只在C线位置聚集显色，检测结果为阴性；如果T线和C线都不显色则说明本检测试纸条检测结果无效。

7.如权利要求6所述的方法，其特征是定量检测方法是：样品池里滴加目标抗原，持续免疫15-20min后放入分析仪中进行荧光信号读出，未滴加样品的试纸条检测线区域与滴加样品后检测区域的荧光淬灭差值作为读出信号，建立此检测技术的标准曲线。

8.如权利要求1所述的方法，其特征是cTnI抗原不同浓度选择为：0-10ng/mL，建立标准曲线。