[发明专利]一种酸性蛋白酶生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及微生物的发酵技术，发酵生产酸性蛋白酶的改进型新方法。

背景技术

传统工艺生产酸性蛋白酶是一次性投入发酵培养基。前期培养基浓度大，粘性强生产菌在富营养环境中生长。其弊端是：(1)不利于菌体正常生长；(2)培养基浓度越大，粘性越强，搅拌所需动力越多，消耗电能越多；(3)培养基浓度越大，溶液的溶解氧效果越差，需要的供氧越多，耗电越多(4)发酵前期营养浓度过高，菌体生长过快，影响酶的正常生产。

除此之外，传统工艺生产酸性蛋白酶生产率低，菌体稳定性不高，不能够大规模生产。

发明内容

针对现有技术中所存在的不足，本发明提供了一种酸性蛋白酶生产工艺，解决菌种稳定性的问题，提高工业生产能力。

为实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：

一种酸性蛋白酶生产工艺，包括流加补料工艺生产酸性蛋白酶的方法：菌种发酵生产，起始阶段加入初始培养基，体积占种子罐容积30～40％；菌种发酵5～10小时后开始进行变速流加补料至发酵结束，流加补料速度为25～40ml/h/L，以初始的发酵液体积为基准计；菌种处于最佳生长期转入发酵生产；发酵生产开始时加入初始培养基，发酵生产10～20 小时后开始以10～20ml/h/L的流速变速流加补料培养基至发酵结束，起始阶段加入初始培养基具体操作为，接种OD600在0.48～1.0的菌种，在通气量160l/h，罐压0.02～0.04MPa，温度37℃，搅拌转速150r/min的条件下，发酵12小时，放罐后，离心收集菌体，悬浮于磷酸缓冲液中，用均质机破碎细胞，然后于10000r/min离心破碎细胞，收集沉淀。

初始培养基，按重量百分比计：玉米粉0.8～3％、豆饼粉4～8％、麸皮1.5～4％、酵母膏0.2～0.5％，余量为水。

补料培养基，按重量百分比计：玉米粉3～8％、豆饼粉8～20％、麸皮5～10％，余量为水。

菌种发酵和发酵生产所用的初始培养基体积分别为种子罐和发酵罐容积的30～40％。

发酵菌种的流加补料速度为25～40ml/h/L，发酵生产的流加补料速度为10～20ml/h/L，均以初始培养基体积计。

发酵菌种的流加持续时间为10～20小时；发酵生产的流加持续时间为70～100小时。

相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：本发明工艺合理给予工作菌营养，能有效地控制工作菌充分利用培养基的营养，调整较好的比生长速率以便菌种更好生长，使菌种及生长环境均呈最佳状态进入产酶阶段特别是选择了合适的种子种龄，利用此工艺培养基组成简单，无需添加各类微量元素；无需补料，生产周期短，充分体现了利用大肠杆菌生产重组蛋白得率高、价格低廉、操作简单等优点；解决菌种稳定性的问题，提高工业生产能力。

具体实施方式

下面对本发明做进一步的说明。

一种酸性蛋白酶生产工艺，包括流加补料工艺生产酸性蛋白酶的方法：菌种发酵生产，起始阶段加入初始培养基，体积占种子罐容积30～40％；菌种发酵5～10小时后开始进行变速流加补料至发酵结束，流加补料速度为25～40ml/h/L，以初始的发酵液体积为基准计；菌种处于最佳生长期转入发酵生产；发酵生产开始时加入初始培养基，发酵生产10～20 小时后开始以10～20ml/h/L的流速变速流加补料培养基至发酵结束，起始阶段加入初始培养基具体操作为，接种OD600在0.48～1.0的菌种，在通气量160l/h，罐压0.02～0.04MPa，温度37℃，搅拌转速150r/min的条件下，发酵12小时，放罐后，离心收集菌体，悬浮于磷酸缓冲液中，用均质机破碎细胞，然后于10000r/min离心破碎细胞，收集沉淀。

初始培养基，按重量百分比计：玉米粉0.8～3％、豆饼粉4～8％、麸皮1.5～4％、酵母膏0.2～0.5％，余量为水。

补料培养基，按重量百分比计：玉米粉3～8％、豆饼粉8～20％、麸皮5～10％，余量为水。

菌种发酵和发酵生产所用的初始培养基体积分别为种子罐和发酵罐容积的30～40％。

发酵菌种的流加补料速度为25～40ml/h/L，发酵生产的流加补料速度为10～20ml/h/L，均以初始培养基体积计。

发酵菌种的流加持续时间为10～20小时；发酵生产的流加持续时间为70～100小时。