[发明专利]褐飞虱沃尔巴克氏体的检测引物、试剂盒和检测方法在审
| 申请号： | 201710998980.2 | 申请日： | 2017-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN107574254A | 公开（公告）日： | 2018-01-12 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 广州威佰昆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6806;C12Q1/6848;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙)44365 | 代理人： | 谢伟 |
| 地址： | 510000 广东省广州市高新技术产*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 褐飞虱沃尔 巴克 检测 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种褐飞虱沃尔巴克氏体的检测引物，其特征在于，其上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
2.一种褐飞虱沃尔巴克氏体的检测试剂盒，其特征在于，包括检测引物和PCR试剂，所述的检测引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括有褐飞虱的DNA提取试剂，该DNA提取试剂包括有稀释缓冲液和DNARelease。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述稀释缓冲液为：30mM NaOH、0.25mM EDTA、15mMTris-HCl，溶剂为水；每20μl稀释缓冲液中加入0.5μl DNARelease。
5.一种褐飞虱沃尔巴克氏体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)先把褐飞虱在无水酒精里浸泡，提取样品DNA；
(2)加入样品DNA稀释10倍为模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2作为PCR引物，进行PCR扩增。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的进行PCR扩增，其反应条件为：94℃预变性5分钟；95℃变性5秒、55℃退火30秒、72℃延伸30秒，30个循环。
7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述提取样品DNA包括以下步骤：
褐飞虱放入稀释缓冲液和DNARelease中；
瞬时离心后，放入PCR仪中进行DNA提取；
DNA提取程序：55℃，5min；98℃，5min；30℃，10s。
8.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，扩增时加入的样品DNA的浓度为是50×10-1-30×10-4ng/μl。
9.一种褐飞虱沃尔巴克氏体DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
先把褐飞虱在无水酒精里浸泡2±0.2分钟，然后把褐飞虱放入稀释缓冲液和DNARelease中；
瞬时离心后，放入PCR仪中进行DNA提取；
DNA提取程序：55℃，5min；98℃，5min；30℃，10s，即得。
10.根据权利要求9所述的提取方法，其特征在于，所述稀释缓冲液为：30mM NaOH、0.25mM EDTA、15mMTris-HCl，溶剂为水；每20μl稀释缓冲液中加入0.5μl DNARelease。
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