[发明专利]一种青木香的组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种青木香的组织培养快繁方法。

背景技术

青木香又名：天仙藤、水木香、痧药。属多年生草质藤本。根圆柱形，直径0.5~1.5厘米，表面灰褐色或灰棕色。茎初生时直立，后攀援。叶互生，叶片三角状长圆形，基部两侧突出如耳。花单生叶腋，斜漏斗形，紫绿色，镰状弯曲。9~10月结果，果实近球形，长约6厘米，直径约4厘米，有6条棱，成熟时开裂。种子扁平，钝三角形，长和宽约4厘米，边缘有白色膜质宽翅。根于春秋二季采挖，晒干备用。夏采藤叶，晒干。生长于长江流域以南各省区及河南、山东有分布。多生于田野、山坡、路旁、山谷、沟边。青木香味辛、苦，性寒。具有行气止痛，解毒消肿，降血压等功效。传统的青木香获取方法是采挖野生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化。此外，青木香种子主要来自野生，其品种混杂，种子稀缺，发芽极低，野生青木香资源已不能适应规模化和标准化生产的需要，成为妨碍青木香产业发展的最大瓶颈。国内外在植物资源、化学成分分析、生药鉴定、药理作用和临床应用、愈伤组织培养及再分化等方面做了大量的工作 ，这些研究为以青木香为基源制剂的临床应用奠定了一定的基础。但是，青木香生产中仍然存在许多理论和实践急需解决的问题。为了谋求青木香产业的发展，引领青木香产业走向高技术、高规格、高水准的科技之路，青木香组织培养已经成为目前研究和开发的热点。因此，非常有必要建立青木香离体再生体系，为青木香的产业化发展提供技术支持。

发明内容

本发明的目的在于提供一种带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了青木香的组织培养快速繁殖，从而实现本发明的目的。技术方法简单，操作容易，种苗粗壮，生长快速，丰产增收的一种青木香的组织培养快繁方法。

本发明的一种青木香的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：

（1）外植体的处理：选取健壮青木香植株上切取带腋芽的茎段作为外植体，剪去叶片，切成2长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉水冲洗4h，再用毛轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒32s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用;

（2）丛生芽导：将步骤（1）处理后的带腋芽茎段切成3.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在24℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3500lx，直至诱导形成丛生芽;

（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的嫩芽长至约3cm时切离并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2900lx，置于培养温度为29℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽;

（4）生根培养：当步骤（2）或（3）的丛生芽长至2.0cm高时，将丛生芽切割成单苗接种至生根培养基中进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为1900lx，培养温度为24℃的条件下培养直至长出根;

（5）试管苗移栽：当小苗长出的新根系长达4cm左右时，并且长出侧根，苗高6cm以上时，将培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入经灭菌过的蛭石中。

步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+ 2mg/L NAA+ 0.4mg/L 6-BA+ 1.2mg/L KT+2.5%蔗糖+0.25%琼脂+0.12%活性炭，pH值为5.3。

步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+3.5mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA+1.5%蔗糖+0.3%琼脂+0.12%活性炭，pH值为5.3。

步骤（5）所述的生根培养基为：MS+12mg/L KH₂PO₄+1.0%蔗糖+0.3%琼脂+0.12%活性炭，pH值为5.3。

本发明的优点是:以青木香带腋芽茎段为外植体建立青木香离体快繁体系，为解决青木香规模化生产奠定基础。本发明以带腋芽茎段为外植体，通过丛生芽诱导、增殖培养、根苗诱导以及试管苗驯化移栽等过程实现了青木香的组织培养快速繁殖，为青木香的产业化发展提供技术支持。技术易撑握，操作方便，得到的种苗健壮，生长发芽快，品种纯正，发芽率高，能满足市场需要。

具体实施方式