[发明专利]一种湖北麦冬内生青霉菌属真菌及在制备甾体皂苷中的应用

说明书

本发明的名称是一种湖北麦冬内生青霉菌属真菌及在制备甾体皂苷中的应用，涉及微生物技术领域。它主要是解决湖北麦冬甾体皂苷受湖北麦冬“块根生产周期长”、“甾体皂苷含量低”、“皂苷提取成本高”等因素导致的市场投放量受限的问题。本发明的内生真菌分离自湖北麦冬（Liriope spicata var.prolifera）的活体块根。经18S rDNA序列鉴定为青霉菌属（Penicillium sp），已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2016年12月7日，保藏编号为CCTCC No.M2016724。本发明是利用产自湖北省襄阳市欧庙镇湖北麦冬原产地——湖北麦冬GAP基地生产的湖北麦冬，通过湖北麦冬内生真菌菌株液体发酵，产生了湖北麦冬甾体皂苷；本发明的内生真菌是寻找湖北麦冬甾体皂苷新资源的重要微生物。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体地是一种湖北麦冬内生真菌，该内生真菌是能够产生湖北麦冬甾体皂苷的内生青霉菌属真菌。

背景技术

湖北麦冬甾体皂苷，是国家地理标志产品、湖北道地中药材植物——湖北麦冬Liriope spicatavar. prolifera Y. T. Ma块根的主要活性成分，它的皂苷元基本骨架属于螺甾烷(Spirostane，共有27个碳原子组成)的衍生物，依照螺甾烷结构中C25的构型和环的环合状态，可将其分为螺甾烷醇类（C25为S构型）、异螺甾烷醇类（C25为R构型）、呋甾烷醇类（F环为开链衍生物）、变形螺甾烷醇类（F环为五元四氢呋喃环）四种类型。现已从湖北麦冬块根中分离出14种皂苷，其主要苷元是薯蓣苷元(Diosgenin)和鲁斯可苷元(Ruscogenin)，均为C25(S)异构体，其中以山麦冬皂苷C(Ls-S3)含量较高。研究表明：甾体皂苷具有抗心肌缺血、抗血栓形成、耐缺氧、抗衰老、降血糖等方面的药理作用，它对改善机体免疫系统、增进胃肠运动机能等方面都有着积极的影响，最新的研究表明它还具有抗肿瘤作用。

尽管随着手性合成和寡糖合成方法的进展，已有一些关于湖北麦冬甾体皂苷化合物全合成的报道，但是由于甾体皂苷结构的复杂性，合成难度非常大，且化学合成对环境造成巨大的污染，目前主要还是通过分离块根提取物直接获得。但是，在湖北麦冬实际生产中，存在着诸如“连作障碍种植面积小”、“受气候条件影响较大”、“块根生产周期长”、“甾体皂苷含量低”、“皂苷提取成本高”等因素，导致湖北麦冬甾体皂苷的市场投放受到限制。目前，关于一种能够通过微生物发酵产生湖北麦冬甾体皂苷的内生真菌及其应用，还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备湖北麦冬甾体皂苷的内生真菌，内生真菌是分离自湖北省襄阳市欧庙镇湖北麦冬GAP基地生产的湖北麦冬活体块根，是通过微生物发酵产生湖北麦冬甾体皂苷的内生真菌及在制备湖北麦冬甾体皂苷中的应用。

本发明的技术解决方案是：内生青霉菌属真菌分离自湖北麦冬（Liriope spicatavar. proliferaY.T.Ma）的活体块根，经18S rDNA序列鉴定为青霉菌属（Penicillium sp），已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2016年12月7日，保藏编号为 CCTCC No.M2016724。

本发明的技术解决方案中所述的青霉菌的制备步骤是：

(1)将清洗干净的湖北麦冬块根用75%(V/V)乙醇浸泡2min，用无菌水漂洗；再用有效氯含量4-6%的次氯酸钠溶液浸泡2min，最后用无菌水漂洗、蘸干；

(2)将上述湖北麦冬块根在无菌条件下剪去两头褐变部分，切割成0.5cm×0.5cm组织小片，置于PDA培养基(含氨卞青霉素，终浓度为50ug/ml)上，每皿植入2片，用parafilm封口膜将培养皿密封后置于28℃恒温培养；