[发明专利]一种光叶珙桐组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种光叶珙桐组培快繁方法，属于生物技术领域。

背景技术

光叶珙桐（Davidia involucrata Baill. var. vilmoriniana）落叶乔木，为我国特有的单科属植物，共有两个种，一为珙桐，一为光叶珙桐，两种相似，区别在于叶面是否被毛。为1千万年前新生代第三纪留下的孑遗植物，受第四纪冰川时期的影响，大部分地区的珙桐种群相继灭绝，现仅在我国四川、贵州、湖北等地有零星分布，被《中国植物红皮书》和《中国珍稀濒危保护植物名录》收录，已被列为国家一级重点保护野生植物。

光叶珙桐花枝优美，如白鸽展翅，花期种，满树的光叶珙桐花如白鸽般徜徉于绿荫中，因而得名鸽子树。珙桐喜欢生长在海拔1500-2200米的润湿的常绿阔叶落叶阔叶混交林中。多生于空气阴湿处，喜中性或微酸性腐殖质深厚的土壤，在干燥多风、日光直射之处生长不良，不耐瘠薄，不耐干旱。幼苗生长缓慢，喜阴湿，成年树趋于喜光。

自然条件下光叶珙桐树结实率极低，往往满树鲜花飞舞，秋季却难见一果，素有千花一果之说。常规利用果实进行繁殖，采种极其困难且种子萌发率往往不超过10%，导致光叶珙桐保护一直未得到良好的实施。

发明内容

本发明的目的是为了建立一套光叶珙桐利用带芽茎段进行无性快速繁殖的技术，从而提出构建一套不单纯依靠种子进行繁殖的新育苗方式，利用组培快繁技术扩繁出的脱毒苗最大限度的保持了母本的特性，同时可在短期内获得大量性状一致，脱毒的光叶珙桐组培苗，为野生光叶珙桐资源的保护、群落的恢复和合理开发利用提供了一种新的技术支撑。

本发明可通过以下技术实现：

一种光叶珙桐组培快繁方法，由下述步骤组成：

A:外植体获取：秋季9-10月份间，光叶珙桐叶片由青转黄且未落叶时，剪取一年生枝条，采集过程中需全程以湿报纸裹住保湿运输，做为外植体材料来源；

B:无菌茎段获取：截取光叶珙桐带芽茎段，顶芽留1.5-2cm茎段，侧芽上端留0.5cm，下端留1.5-2cm茎段，以800倍多菌灵浸泡20min，而后滴入2滴吐温，2-3滴洗洁精，充分搅匀，清洗后，用纱布盖好容器口，置于自来水下流水冲洗2h；冲洗后的材料于超净工作台上，先用75%酒精浸泡30s，而后直接将外植体投入0.1%升汞中消毒8min，无菌水冲洗5次，每次2min，材料上残留的水分用经灭菌后的吸水纸吸干；切去破损，褐化的部分，接种前切掉顶端和底端各2mm茎段，每个待接种茎段保留一个冬芽，接种于过渡培养基上，过度培养基为不添加任何植物生长调节剂的WPM基础培养基；培养室温度18-23℃，湿度50-70%，光照强度2200lx，每天光照时间12-14h，10d后转入诱导培养基；

C:侧芽的萌发诱导：经过30d的培养，挑选叶片展开良好，无菌，无变异的嫩芽，去掉老的茎段，单独留下新萌发的嫩茎，转入愈伤组织诱导培养基培养，接种时轻压外植体材料以使材料与培养基充分接触；培养室温度20-25℃，湿度50-70%，光照强度2200lx，每天光照时间12-14h，25d后可见白色或米白色或米白色疏松愈伤组织长出，待愈伤组织在切口处长成环状时，转入丛生芽诱导培养基培养；

D:丛生芽诱导与增殖：将愈伤长势良好，疏松、开始出现微小侧芽的幼苗，去掉已完全展开的叶片，接种于增殖培养基中，接种深度以幼苗刚好能站立为宜，培养室温度20-25℃，湿度50-70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，培养40d后，可见部分幼嫩的侧芽萌发，将侧芽切下继续增殖，长势较好的幼苗挑出；

E:壮苗生根培养：截取高3-5cm，叶3-5片的丛生苗，接种于壮苗生根培养基上，培养室温度18-23℃，湿度50-70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，培养20d后可得健壮的光叶珙桐生根苗。

采用上述技术方案的有益效果是：

本发明相对于利用传统种子播种进行繁殖的方法，具有以下显著特征：繁殖速度快，从外植体到成苗只需4个半月；繁殖系数高，种苗成指数增长；不受外界环境影响，一年四节均可进行种苗繁育；种苗一致性好，分离情况发生较少；种苗全部为脱毒苗，有利于提高抗性，少病虫害；投资少，经济效益高，可规模化繁殖，解决种苗来源这一瓶颈，组培苗的野生环境栽培有利于野生居群的恢复，产生良好的经济、社会和生态效益。

具体实施方式

一种光叶珙桐组培快繁方法，由下述步骤组成：