[发明专利]一种罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法

权利要求书

1.一种罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法，其特征在于：

1)罗伊式乳杆菌增菌培养基制备：

将葡萄糖15-25g、酵母浸粉15-25g、硫酸锰0.02-0.05g、吐温80 0.5-1.0mL，菊糖1.5-2.5g、酪蛋白胨4-6g、磷酸氢二钠4-6g、亮氨酸15-20mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至5.5-7.0，于121℃下灭菌得罗伊式乳杆菌增菌培养基；

2)罗伊式乳杆菌培养及菌体收集：

将罗伊式乳杆菌按2％-5％的接种量接入罗伊式乳杆菌增菌培养基中，35-41℃恒温培养18-24h，然后离心倒掉上清液，收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤后离心得罗伊式乳杆菌菌泥；

3)罗伊式乳杆菌胞壁蛋白酶制备：

按每g罗伊式乳杆菌菌泥中添加20-30mL的磷酸缓冲液，35-45℃保温1-2h后离心得上清液即为胞壁蛋白酶的酶液，采用1-3KDa超滤去除小分子物质，然后在保留液中添加CaCl₂，控制CaCl₂的浓度为8-15mM，最后通过冷冻干燥获得罗伊式乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；

4)羊乳活性饮料的制备：

将鲜羊奶经脱脂后调节pH值至6.0-8.0按质量体积比向其中加入1-3％的罗伊式乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和0.01-0.04％的CaCl₂，于35-45℃下酶解2-3h，然后再按质量体积比添加0.5-1.0％的β-环糊精，0.2-0.4％的拐枣多糖、0.3-0.5％的低聚木糖、4-6％的赤藓糖醇、3-5％的木糖醇、0.1-0.3％的L-苹果酸，0.10-0.25％的柠檬酸，0.10-0.25％的柠檬酸钠混合均匀后经均质、杀菌后即得到含降压肽的羊乳活性饮料，其ACE抑制活性为75-88％。

2.根据权利要求1所述的罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法，其特征在于：所述步骤2)的离心是在4-10℃、6000-8000r/min下离心15-25min。

3.根据权利要求1所述的罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法，其特征在于：所述步骤3)的磷酸缓冲液的pH＝7.0，每升磷酸缓冲液中含180-210g氯化锂、0.2-0.6g溶菌酶和3000-5000U变溶菌素。

4.根据权利要求1所述的罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法，其特征在于：所述步骤3)的离心是在4-10℃、4000-6000r/min下离心20-30min。

5.根据权利要求1所述的罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法，其特征在于：所述步骤4)的均质为温度为15-30℃。

6.根据权利要求1所述的罗伊式乳杆菌蛋白酶制备含降压肽羊乳活性饮料的方法，其特征在于：所述步骤4)的拐枣多糖制备过程为：取新鲜拐枣经洗净后进行打浆，然后加入20倍拐枣重量的水，搅拌均匀，于90℃条件下保温2h，然后抽滤获得拐枣多糖提取液，冷却至38℃后按质量体积比接入2％的保拉迪酵母活化液，37℃恒温培养24h除去拐枣中的单糖和双糖，离心收集保拉迪酵母菌体，将上清液用旋转蒸发仪浓缩至1/20，再按1:3的体积比加入无水乙醇，然后用布氏漏斗抽滤获得拐枣粗多糖，再将拐枣粗多糖复水加入氯仿和正丁醇除蛋白，然后取水相再次加入氯仿和正丁醇，三次脱蛋白后通过冷冻干燥获得拐枣多糖。