[发明专利]一种微生物发酵制备脱水穿心莲内酯的方法

权利要求书

1.一种脱水穿心莲内酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1，菌种培养：

将短刺小克银汉霉菌株接种于新鲜斜面培养基上，25℃恒温培养3d；将菌体从斜面培养基转接至装有液体培养基的三角瓶中，振荡培养2d后成为种子液；吸取种子液转接至装有发酵培养基的三角瓶中，振荡培养2d后成为培养液；

其中，所述液体培养基的配方为：去皮煮沸的土豆泥，200g/L；磷酸二氢钾，3g/L；硫酸镁，0.75g/L；葡萄糖，20g/L；维生素B1，0.15g/L；调节pH值至6.0；

所述发酵培养基为在上述液体培养基中再添加20-40μM苯并三氮唑类离子液体，阳离子结构如下：

其中，n为自然数；

步骤S2，微生物转化：

向上述发酵培养液中投入穿心莲内酯0.5-1.5g/L，振荡培养3d进行转化；

步骤S3，转化产物提取：

转化终止后将转化液的pH值调节至5.2，静置过夜，抽滤，收集滤液，滤液用乙酸乙酯反复萃取，合并乙酸乙酯萃取液，蒸发回收乙酸乙酯即得转化产物；

步骤S4，高速逆流纯化：

用高速逆流色谱分离纯化转化产物中的脱水穿心莲内酯，溶剂系统为乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸，将该溶剂系统剧烈震荡后静置分层，将上下两相分开，上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集脱水穿心莲内酯对应流份，浓缩干燥即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基还含有4-8μM缬氨酸。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述离子液体的阴离子为溴或氯离子。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：振荡培养条件为25℃、135r/min。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述溶剂系统为乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸，四者体积比为4:1:5:0.05。

6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：高速逆流色谱的仪器的分离管为β值0.5-0.8的多层聚四氟乙烯螺旋管，螺旋管直径2.3mm，工作转速为750r/min。

7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述高速逆流色谱的流动相流速为1.3mL/min，分离温度为35℃。

8.苯并三氮唑类离子液体在诱导短刺小克银汉霉将穿心莲内酯转化为脱水穿心莲内酯中的应用，所述苯并三氮唑类离子液体的阳离子结构如下：

其中，n为自然数。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述离子液体的阴离子为溴或氯离子。