[发明专利]一种H7亚型禽流感DNA疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种H7亚型禽流感DNA疫苗的制备方法，其特征在于，由H7亚型禽流感病毒HA基因和真核表达载体连接构建的质粒表达获得所述H7亚型禽流感DNA疫苗，所述禽流感病毒HA基因为H7亚型禽流感病毒的HA基因，序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述H7亚型禽流感病毒的HA基因序列根据鸡的密码子偏嗜性进行密码子优化，优化的optiHA基因序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述真核表达载体为限制性内切酶SacI、XhoI同时酶切质粒pCAGGK得到的载体片段。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.获取野生H7亚型禽流感病毒的HA基因，其序列如SEQ ID NO.3所示；

S2.将H7亚型禽流感病毒的HA基因根据鸡的密码子偏嗜性进行优化，优化的optiHA基因序列如SEQ ID NO.4所示；

S3.用内切酶SacI和XhoI分别酶切处理optiHA基因与真核表达载体；

S4.回收酶切后的目的片段与载体片段，连接、转化、筛选阳性菌落后，提取阳性质粒；

S5.步骤S4获得的阳性质粒表达获得H7亚型禽流感DNA疫苗。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S3所述酶切的反应体系为：5μL 10×buffer、5μL阳性质粒、2μL 内切酶SacI、2μL 内切酶XhoI、ddH₂O 36μL补足50μL；步骤S4所述连接的反应体系和反应条件为：1μL T4 DNA连接酶buffer、1μL T4 DNA连接酶（5U/μL）、1μL 空载体DNA片段 （50ng/μL）、7μL optiHA基因片段；依次将上述试剂震荡混匀后，16℃水浴4-8h。

6.根据权利要求1-5任一所述方法制备获得的H7亚型禽流感DNA疫苗。

7.权利要求6所述H7亚型禽流感DNA疫苗在制备预防或免疫治疗H7亚型禽流感的疫苗或药物方面的应用。

8.以权利要求6所述H7亚型禽流感DNA疫苗为主要活性成分制备的预防或免疫治疗H7亚型禽流感的疫苗或药物。

9.一种优化的H7亚型禽流感HA基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

10.权利要求9所述优化的H7亚型禽流感HA基因在制备H7亚型禽流感DNA疫苗方面的应用。