[发明专利]一种大鲵肝金属硫蛋白的改性方法

说明书

本发明公开了一种大鲵肝金属硫蛋白的改性方法，本发明属于生物肽改性技术领域。本发明方法通过采用脂肪酸对大鲵肝金属硫蛋白进行改性，提高了大鲵肝金属硫蛋白的乳化性和稳定性，同时也提高了被人体吸收的效果；本发明方法，通过采用超声波分散，有效的分离了金属硫蛋白中硫蛋白与金属离子，使得脂肪酸酰氯更易通过供价结合的方式与硫蛋白结合，从而完成对金属硫蛋白的改性。

技术领域

本发明属于生物肽改性技术领域，具体涉及一种大鲵肝金属硫蛋白的改性方法。

背景技术

金属硫蛋白(MT)是一种重要、奇异、生理功能强的活性物质，被誉为生命的守护神之一；目前，国内外科技工作者均采用人工喂养的动物(多为两栖动物)肝脏为原料来获得金属硫蛋白，通过这种方式得到的金属硫蛋白结构、性能单一，稳定性差、二次被人服用时，被人体吸收效果不佳，从而影响了金属硫蛋白本该对人体起的作用。因此，研究通过对大鲵肝金属硫蛋白进行改性来改变其稳定性等性能是研究人员正在攻克的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种大鲵肝金属硫蛋白的改性方法，解决了现有技术金属硫蛋白稳定性差、被人体吸收效果不佳的问题。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：一种大鲵肝金属硫蛋白的改性方法，该方法通过以下步骤实现：

步骤1，向脂肪酸中加入三氯化磷，搅拌反应3-6h，再分液，并对上层液体蒸馏，获得脂肪酸酰氯；

步骤2，取大鲵肝金属硫蛋白并向其中加入N-甲基吡咯烷酮和三氟乙酸水溶液，搅拌均匀，获得金属硫蛋白液；

步骤3，用氢氧化钠溶液调节所述步骤2获得的金属硫蛋白液的pH值至2-5，超声波分散，获得分散后的金属硫蛋白液；

步骤4，将所述步骤1获得的脂肪酸酰氯加入所述步骤3获得的分散后的金属硫蛋白液中，并搅拌反应4-6h，获得改性后的金属硫蛋白混合液；

步骤5，向所述步骤4获得的改性后的大鲵肝金属硫蛋白混合液中加入有机溶剂，离心、干燥，获得改性后的大鲵肝金属硫蛋白。

优选地，所述步骤1中，所述脂肪酸为月桂树脂酸、豆蔻酸、软脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸中的至少一种。

优选地，所述步骤1中，所述搅拌反应的温度为40-70℃。

优选地，所述步骤2中，所述三氟乙酸水溶液的浓度为0.01-0.05mol/L。

优选地，所述步骤3中，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.01-0.05mol/L。

优选地，所述步骤4中，所述搅拌反应的温度为-5-5℃。

优选地，所述步骤5中，所述有机溶剂为丙酮、乙醇中的至少一种。

优选地，所述步骤2中，所述大鲵肝金属硫蛋白的提取方法为：

步骤2.1，采用添加诱导剂的饲料投喂大鲵进行诱导、宰杀，获得大鲵肝脏；

步骤2.2，采用缓冲液对所述步骤2.1获得的大鲵肝脏进行匀浆处理，再离心分离，获得金属硫蛋白提取液；

步骤2.3，采用葡聚糖和亚氨基二乙酸混合物的层析柱对所述步骤2.2获得的金属硫蛋白粗提液层析，获得金属硫蛋白层析液；

步骤2.4，将所述步骤2.3获得的金属硫蛋白层析液进行真空冷冻干燥，获得大鲵肝金属硫蛋白。

优选地，所述步骤2.1中，所述诱导的具体方法为：将诱导剂混合于饲料中，采用所述混有诱导剂的饲料连续投喂大鲵6-12天，每天投喂1-3次。

优选地，所述步骤2.1中，所述诱导剂为乙酸锌、硫酸锌和硫酸铜中的至少一种，所述诱导剂添加的剂量为两栖体重的20-120mg/kg。