[发明专利]外泌体蛋白CD5L的检测方法

权利要求书

1.一种外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)预处理，取新鲜血清，经离心，初步去除杂质，取上清，进行超声破碎；

2)于固相载体上包被单克隆抗体CD5L；

3)向步骤2)所得固相载体上加入封闭液进行封闭；

4)向步骤3)封闭之后的固相载体中加入步骤1)预处理的血清，孵育；

5)向步骤4)封闭之后的固相载体中加入辣根过氧化物酶标记的二抗，孵育；

6)在步骤5)中得到的产物在加入TMB显色液显色，检测OD值。

2.根据权利要求1所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤1)将所述上清与含1％脱脂奶的PBS按照体积比1:29进行稀释，然后进行超声破碎；

优选地，所述超声破碎条件为间隔5s开关一次，至少60循环。

3.根据权利要求1或2所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤1)所述离心在室温或4℃条件下进行，3000g，30分钟。

4.根据权利要求1或2所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤2)中固相载体上所述包被单克隆抗体CD5L的含量为200ng/孔；包被稀释液为碳酸盐缓冲液；优选地，包被温度为4℃，包被时间为12小时。

5.根据权利要求1或2所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤3)所述固相载体需要经过PBST洗涤至少5遍；所述封闭液为含5％脱脂奶的PBS；优选地，封闭时间为2小时。

6.根据权利要求1或2所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤4)所述固相载体需要经过PBST洗涤至少3遍；步骤4)所述预处理的血清添加量与包被单克隆抗体CD5L的质量比为(70～100ug):200ng；孵育时间优选为3.5小时。

7.据权利要求1或2所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤5)所述辣根过氧化物酶标记的二抗用含1％脱脂奶的PBS按照1:3500的比例稀释，孵育时间优选为1.5小时。

8.根据权利要求1或2所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，步骤6)中加入的TMB显色液与所述包被单克隆抗体CD5L的体积质量比为100ul:200ng；优选加入TMB显色液后于37℃，孵育至少10分钟，然后加入50mM H₂SO₄终止反应。

9.根据权利要求1-8任一项所述的外泌体蛋白CD5L的检测方法，其特征在于，于450nm处检测OD值。