[发明专利]禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原、亚单位疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原、亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明的一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原，所述融合抗原包括禽腺病毒Hexon蛋白和鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白。所述融合抗原具有如下氨基酸序列：（1）由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或（2）与序列SEQ ID No.1限定的氨基酸序列同源性在95%至100%编码相同功能蛋白质的氨基酸序列。本发明制得的亚单位疫苗的保护性抗原是融合抗原，融合抗原的生产采用基因工程发酵的方式制备，具有成本低、抗原纯度高、免疫原性好以及安全性高优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原、亚单位疫苗及其制备方法。

背景技术

禽腺病毒(FAV)呈世界性分布，血清型众多，该病毒引起的肉鸡心包积水综合症就是由禽腺病毒-C血清4型腺病毒感染引起，全国各地对于该病均有报道，且呈现发病率不断上升趋势，严重危害我国养禽业健康发展，Hexon蛋白是禽腺病毒的主要结构蛋白，该蛋白具有免疫原性。

鸡传染性法氏囊病是雏鸡的一种急性接触性传染病，常呈地方流行，给养禽业带来较大经济损失，VP2蛋白是鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要结构蛋白与保护抗原。

近年流行病学调查显示，鸡传染性法氏囊病的发生增加了禽腺病毒发病机率，造成致死率升高，凸显出鸡传染性法氏囊病与禽腺病毒协同防控的重要性。目前关于两种蛋白的基因工程疫苗有以下缺点：(1)仅有VP2基因工程疫苗商品化生产，而Hexon基因工程疫苗尚处于基础研究阶段。(2)单独表达两种蛋白，混合后制备二联疫苗，生产效率低，重复劳动。(3)病毒亚单位疫苗生产过程中两种蛋白直接串联融合表达，破坏蛋白原有的三级构象，造成抗原性与亲水性差异。(4)当前并无有关禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合蛋白的抗原性研究，也没有对Hexon与鸡VP2融合蛋白进行免疫保护作用和疫苗研究。

因此，有必要开发一种传染性法氏囊VP2蛋白与禽腺病毒Hexon蛋白融合表达的方法，用于制备抗原性良好、生产成本低的鸡传染性法氏囊病与禽腺病毒二联基因工程亚单位疫苗。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种抗原性良好的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原、基因工程亚单位疫苗及其制备方法。

为达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：本发明的一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原，所述融合抗原包括禽腺病毒Hexon蛋白和鸡传染性法氏囊病病毒抗原VP2蛋白。

进一步地，所述融合抗原具有如下氨基酸序列：

(1)由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或

(2)与序列SEQ ID No.1限定的氨基酸序列同源性在95％至100％编码相同功能蛋白质的氨基酸序列；或

(3)SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经增加、缺失或替换一个或多个氨基酸具有同等活性的由(1)衍生的蛋白。

本发明的一种核酸分子，其编码所述的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原。

进一步地，其核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。

本发明的一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2亚单位疫苗，由禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原与免疫佐剂混合乳化而成。

本发明所述的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原的制备方法，包括以下步骤：

(1)PCR扩增禽腺病毒Hexon和鸡传染性法氏囊病病毒抗原VP2融合蛋白的基因片段；