[发明专利]禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原、亚单位疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原，其特征在于：所述融合抗原由禽腺病毒Hexon蛋白和鸡传染性法氏囊病病毒抗原VP2蛋白组成，其具有如下氨基酸序列：

由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.一种核酸分子，其编码权利要求1所述的融合抗原。

3.根据权利要求2所述的核酸分子，其核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。

4.一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2亚单位疫苗，其特征在于：由权利要求1中禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原与免疫佐剂混合乳化而成。

5.权利要求1所述的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)PCR扩增权利要求1所述融合蛋白的基因片段；

(2)将步骤(1)中的特异性核苷酸片段克隆到表达载体，制备获得重组质粒pET-28a-Hexon-VP2，将其转化宿主菌，获得重组菌株；

(3)禽腺病毒Hexon和鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合蛋白在大肠杆菌表达系统中表达；

(4)收集菌体，超声裂解后收集沉淀，并纯化得到禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原。

6.根据权利要求5所述的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，采用SOE-PCR方法，获得鸡传染性法氏囊病病毒VP2与禽腺病毒Hexon特异性核苷酸片段，其在两基因间插入了特异性连接肽片段，特异性连接肽片段氨基酸序列为SEQ ID NO.2；

在步骤(2)中，宿主菌为大肠杆菌Rosseta；

在步骤(3)中，诱导用IPTG，浓度为1mM。

7.根据权利要求5所述的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，禽腺病毒Hexon基因与鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆：

根据禽腺病毒Hexon蛋白保守的基座区P1、P2序列设计引物对1(F1、R1)，另外根据鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列设计引物对2(F2、R2)；并且在R1与F2引物序列中加入特异性连接肽序列G₂SAG₂SA，制得禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合基因；

引物F1具有SEQ ID NO.3的核苷酸序列；

引物R1具有SEQ ID NO.4的核苷酸序列；

引物F2具有SEQ ID NO.5的核苷酸序列；

引物R2具有SEQ ID NO.6的核苷酸序列。

8.一种禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2亚单位疫苗的制备方法，其特征在于：权利要求1中禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2融合抗原，与免疫佐剂混合乳化，制备禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2亚单位疫苗。

9.权利要求4所述的禽腺病毒Hexon与鸡传染性法氏囊病病毒VP2亚单位疫苗在制备免疫预防鸡传染性法氏囊病和禽腺病毒的感染疾病的产品中的应用。