[发明专利]一种耐热腈水合酶、工程菌及其在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用

权利要求书

1.一种耐热腈水合酶，其特征在于，包括：碱基序列如SEQ ID NO.4所示的编码α亚基的基因、碱基序列如SEQ ID NO.5所示的编码β亚基的基因以及碱基序列如SEQ ID NO.6所示的编码活性元件的基因。

2.如权利要求1所述的耐热腈水合酶，其特征在于，所述腈水合酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.7所示。

3.一种编码如权利要求1或2所述腈水合酶的基因的表达盒、重组载体和转化子。

4.一种工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，其特征在于，所述目的基因为如权利要求1或2所述的耐热腈水合酶基因。

5.如权利要求4所述的工程菌在催化腈化合物水合反应生成酰胺中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述腈化合物为丙烯腈、3-羟基丙腈、3-氰基吡啶、4-氰基吡啶、苯甲腈、3-甲基苯甲腈和苯乙腈中的一种。

7.一种利用耐热腈水合酶催化腈化合物水合反应生成酰胺的方法，其特征在于，包括：

(1)制备如权利要求3所述的工程菌；

(2)制备所述工程菌的静息细胞悬液；

(3)将静息细胞悬液与底物、腈化合物混合，反应制得产物。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述反应的温度为20～40℃，反应液的pH值为6.0～9.0。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述静息细胞悬液的制备方法包括：将所述工程菌活化后，扩大培养至OD₆₀₀达到0.6～1.2，加入诱导剂，继续培养，离心收集细胞，用缓冲液重悬，获得静息细胞悬液。