[发明专利]热稳定性疫苗组合物及其制备方法

说明书

本申请是发明名称为“热稳定性疫苗组合物及其制备方法”、申请号为“201280035108.3(PCT/US2012/038457)”、申请日为2012年5月17日的申请的分案申请。

政府支持声明

本发明在国立健康研究所UO1-A1-08-2210授权下由政府支持作出。政府具有本发明的某些权利。

技术领域

本发明一般涉及干燥疫苗组合物的领域。更具体而言，涉及生产结合至佐剂并且包含免疫刺激分子的干燥疫苗组合物的方法。

背景技术

包含重组蛋白的疫苗受益于或绝对需要佐剂，以诱发免疫应答。(Callahan等,1991,The importance of surface charge in the optimization of antigen-adjuvant interactions,Pharm.Res.8(7):851-858；Singh和O'Hagan 1999,Advances in vaccine adjuvants,Nat Biotechnol 17(11):1075-81；以及O'Hagan等,2001,Recent developments in adjuvants for vaccines against infectious diseases,Biomol Eng 18(3):69-85)。铝盐佐剂是目前最广泛使用的一般用于人的佐剂，这是因为在施用至儿童和成人的疫苗中安全使用的长久历史。FDA批准的疫苗中目前出现的唯一佐剂是铝盐佐剂、氢氧化铝和磷酸铝。铝盐佐剂提高疫苗的免疫原性并且通过减少疫苗中蛋白质剂量水平引起接种结果的显著提高，提高了保护性抗体的滴度，并且减少了在已经完成主要系列接种之后的每年接种需要。但是，在基于重组蛋白、肽和化学合成疫苗的许多亚单位疫苗中铝盐佐剂的使用存在明显的限制。这些限制包括疫苗存储和稳定性的一般方面，因为包含铝佐剂的疫苗仅仅在窄温度范围内可存储，并且不能冷冻。进一步限制包括普遍接受的观点：铝佐剂相对弱，不促进细胞免疫的发展，并且在中和抗体需要用于阻断病毒感染或阻止生物毒素活性的情况下可利于开发非中和的抗体。

在铝佐剂的情况下，已经建议，为了提供足够的免疫原性，抗原必须被吸附在佐剂的表面上。(Gupta等,1995,Adjuvant Properties of Aluminum and Calcium Compounds.Pharmaceutical Biotechnology.6:229-248；以及White和Hem,2000,Characterization of aluminium-containing adjuvants,Dev Biol(Basel)103:217-28)。通常通过抗原和佐剂之间的静电相互作用促进该吸附，并且通常选择配制pH以使抗原和佐剂带相反的电荷(Callahan等1991)。也可通过与缓冲盐如磷酸盐、琥珀酸盐和柠檬酸盐的表面交换反应，改变佐剂上的表面电荷(Hem和White,1984,Characterization of aluminum hydroxide for use as an adjuvant in parenteral vaccines.J Parenter Sci Technol,38(1):p.2-10；Chang等,1997,Role of the electrostatic attractive force in the adsorption of proteins by aluminum hydroxide adjuvant.PDA J Pharm Sci Technol,51(1):p.25-9；以及Rinella等,1996,Treatment of aluminium hydroxide adjuvant to optimize the adsorption of basic proteins.Vaccine,14(4):p.298-300)。对铝盐佐剂的作用机制了解不多，但是可能是由于数个不同的机制。(Lindblad 2004."Aluminium compounds for use in vaccines"Immunol.Cell.Biol.82(5):497-505；Gupta和Siber,1995,Adjuvants for Human Vaccines--Current Status,Problems and Future-Prospects.Vaccine13(14):1263-1276；Gupta和Rost,2000,Aluminum Compounds as Vaccine Adjuvants,In O'Hagan D,editor Vaccine Adjuvants:Preparation Methods and Research Protocols,ed.,Totowa,N.J.:Humana Press Inc.p 65-89；Cox和Coulter,1997,Adjuvants--a classification and review of their modes of action,Vaccine 15(3):248-256)。通常提出的机制是佐剂用作在注入部位的储库，其中抗原在施用后缓慢释放。(Cox和Coulter，1997)。另一提出的机制是佐剂帮助递送抗原至抗原呈递细胞(Lindblad 2004)。进一步提出的机制是佐剂用作免疫刺激剂并且诱发Th2细胞因子(Grun和Maurer 1989,Different T helper cell subsets elicited in mice utilizing two different adjuvant vehicles:the role of endogenous interleukin 1in proliferative responses.Cell Immunol 121(1):134-145)。仍另一提出的机制是佐剂使得佐剂表面上的蛋白质抗原不稳定，造成它们更容易遭受蛋白水解降解(Jones等,2005,Effects of adsorption to aluminum salt adjuvants on the structure and stability of model protein antigens.J Biol Chem 280(14):13406-13414；以及That等,2004."Antigen stability controls antigen presentation"J.Biol.Chem.279(48):50257-50266)。