[发明专利]一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽

权利要求书

1.一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于氨基酸序列为Asp-Gln-Leu-Thr-Lys（DQLTK）。

2.根据权利要求1所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的调脂五肽以厚壳贻贝粉末为原料，通过木瓜蛋白酶和胰蛋白酶分步酶解，乙醇醇沉，再经Sephadex G-15凝胶色谱柱层析纯化和高效液相色谱分离纯化得到。

3.根据权利要求2所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的厚壳贻贝粉末与蒸馏水的质量体积比为1g：15~25mL，两者充分搅拌得到酶解底物；搅拌过程中温度条件为50~70℃恒温，搅拌时间为1.5~2.5h；酶解结束后均采用沸水浴灭酶。

4.根据权利要求2所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的木瓜蛋白酶的加入量为厚壳贻贝粉末质量的0.3~0.5倍，酶解pH为6.5~7.5，酶解时间为2.0~3.5h；胰蛋白酶加入量为厚壳贻贝粉末质量的0.07~0.15倍，酶解pH为9.5~10.5，酶解时间为2.0~4.0h；胰蛋白酶酶解结束后溶液pH调至中性，酶解液浓缩至原体积的1/25~1/15。

5.根据权利要求2所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的乙醇醇沉操作为在酶解浓缩液中加入3~6倍体积的85~95%乙醇，搅拌后静置，离心取沉淀，得到的沉淀即为调脂五肽粗品。

6.根据权利要求2所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的Sephadex G-15凝胶色谱柱层析纯化操作为：用蒸馏水将Sephadex G-15凝胶溶胀后装柱，检查柱均匀性后上样，用自动取样器收集洗脱液，在280nm下测紫外吸光度，做曲线；重复上样，根据吸光度曲线收集分离的溶液；上样溶液由质量体积比为1g：3~7mL的调脂五肽粗品和蒸馏水混合而成。

7.根据权利要求2所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的高效液相色谱分离纯化条件为：色谱柱：反相C18键合硅胶柱；流动相：0~4min，水；4~16min，60~80%水，20~40%乙腈；16~35min，乙腈；流速：0.7~1.3ml/min，柱温25~35℃，检测波长为254 nm和280 nm，收集主要色谱峰，冻干得到调脂五肽纯品。

8.根据权利要求2所述的一种厚壳贻贝闭壳肌酶解调脂五肽，其特征在于：所述的厚壳贻贝粉末为厚壳贻贝闭壳肌脱脂干燥得到。