[发明专利]针对小麦纹枯病防治药剂的室内生测方法

权利要求书

1.一种针对小麦纹枯病防治药剂的室内生测方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步、取若干小麦种子，对其表面进行消毒并洗涤干净；采用无菌水湿润的滤纸，将小麦种子放在以无菌水湿润的滤纸上，于培养箱中避光培养使小麦种子发芽，当芽长度为0.6-0.8cm时，取出备用；

第一步中，消毒的具体过程为：S1、将小麦种子放入有效氯浓度为1±0.5％的次氯酸钠溶液，并于摇床中震荡；转至S2；

S2、将小麦种子放入无菌水，并于摇床中震荡；

S2步重复至少一次；S1中，震荡时间为5-20分钟；S2中，震荡时间为至少10分钟；S1、S2中，摇床转速为120±10rpm；

第二步、取纹枯病菌菌株并接种至新鲜的平板培养基上活化；将活化后的纹枯病菌再接种至新鲜的平板培养基上继续培养，当菌落半径达到平板半径的2/3～3/4时，用打孔器在菌落边缘打取菌碟，备用；所述菌碟为带有纹枯病菌的培养基，且呈环状；

第二步的具体过程为：先将纹枯病菌菌株从冻存柜中取出，再接种至新鲜的平板培养基上活化，于25℃±2℃下培养至少3天；用打孔器在菌落边缘打取菌碟，将该菌碟转接至新鲜的平板培养基上继续培养5-7天，当菌落半径达到平板半径的2/3～3/4时，用打孔器在菌落边缘打取菌碟，备用；

第三步、取待测药剂，先配制成预定浓度的母液，再按预定梯度稀释成系列浓度的稀溶液，备用；

第四步、将第一步所得的发芽小麦种子分成若干供试组以及一个对照组，各供试组以及对照组中的发芽小麦种子数量相同；所述供试组的数量为第三步所得稀溶液浓度个数的正整数倍，各浓度稀溶液对应的供试组数量相同；

第五步、先将第二步所得菌碟分别套至各发芽小麦种子的芽根部，再将同一供试组或同一对照组的发芽小麦种子的芽根部包入或卷入同一灭菌无纺布中，并在灭菌无纺布外绑扎固定；

第六步、将各供试组放入盛有对应浓度第三步所得稀溶液的器皿中，将对照组放入盛有自来水的器皿中，放置时间为预定的吸收时间；各器皿与供试组或对照组一一对应；各器皿中稀溶液或自来水的体积相同；各供试组或对照组的发芽小麦种子按芽朝上根朝下的方式放置；

第七步、按预定时间间隔向各器皿中分别浇溉等体积的自来水，当达到预定的培养时间时，取出各供试组或对照组的发芽小麦种子，量取其上的病斑长度并记录；

第八步、将与同一浓度稀溶液对应的所有供试组中发芽小麦种子的病斑长度统计在一起并计算平均值，作为与该浓度稀溶液对应的检测值；计算对照组中发芽小麦种子的病斑长度平均值，作为对照值；根据检测值和对照值计算各浓度稀溶液的抑制率；根据抑制率按预定函数计算各浓度稀溶液的几率值Y，所述预定函数的作用为根据指定正态分布的概率值、指定平均值以及指定标准偏差返回正态累积分布函数的反函数值，其中，以抑制率为指定正态分布的概率值，指定平均值为属于实数的预设常数，指定标准偏差为大于零且属于实数的预设常数；按各稀溶液的浓度计算对数浓度值X；先采用回归法算得对数浓度值X与几率值Y的线性回归方程，再根据该线性回归方程算得待测药剂的EC₅₀值；测定结束；其中，

抑制率按下式计算：

几率值Y按下式计算：几率值Y＝NORMINV(probability,mean,standard_dev)，NORMINV函数即为所述预定函数，其中，probability为指定正态分布的概率值，mean为指定平均值，standard_dev为指定标准偏差；

对数浓度值X按下式计算：对数浓度值X＝LN(稀溶液浓度)；

所述线性回归方程为：Y＝a+bX；

EC₅₀值按下式计算：其中，e为自然常数，mean为NORMINV函数中的指定平均值，a和b为线性回归方程中的相应参数；

所述线性回归方程的相关系数R大于0.75。

2.根据权利要求1所述针对小麦纹枯病防治药剂的室内生测方法，其特征是，第一步中，培养时，先将小麦种子平铺在铺有滤纸的玻璃平板中，再加入无菌水湿润滤纸；培养箱温度为25℃±2℃，培养时间为2-3天。

3.根据权利要求1所述针对小麦纹枯病防治药剂的室内生测方法，其特征是，所述平板培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基。