[发明专利]一种卵巢癌AnnexinA3检测试剂盒

权利要求书

1.一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：包括包被有Annexin A3捕获抗体的孔板、Annexin A3标准品S0～S5、浓度分别为1.6ng/mL和0.8ng/mL的质控品、辣根过氧化物酶标记的检测抗体、化学发光底物液A、化学发光底物液B、浓缩洗漆液。

2.根据权利要求1所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的检测抗体的由以下步骤制得：a.HRP5mg溶于1.2mL0.2mol/L pH5.6醋酸盐缓冲液中，加入0.1mol/LNaIO₄溶液0.5mL，2～8℃搅拌反应1小时；

b.加入0.8mol/L乙二醇0.2mL，2～8℃搅拌反应30分钟；

c.将酶液装入透析袋中，用0.001mol/L Ph4.2醋酸盐缓冲液透析过夜；

d.取Annexin A3检测抗体1mg，用pH9.51.0mol/L碳酸盐缓冲液调pH至9.0～9.5，2～8℃搅拌反应3小时；

e.加入NaH₄B溶液使终浓度为1mg/mL，2～8℃搅拌反应1小时，Ph7.4 0.02mol/L磷酸盐缓冲液透析过夜；

f.加等体积甘油，混匀后-20℃保存；

用酶标检测抗体稀释液将辣根过氧化物酶标记的检测抗体稀释为1∶250。

3.根据权利要求2所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶内加有含pH＝7.4HEPES缓冲液50mM，BSA2.1～2.4g/L，MgSO₄11～13mM，NaCl1.2～1.8mM，ZnSO₄0.6～0.9mM，β-环糊精0.6～1.2g/L，海藻糖1.2～1.8g/L，甘油1.0～1.4g/L，十二烷基二甲基甜菜碱1.2～1.8g/L，防腐剂Proclin3001.1～1.5g/L的稳定剂。

4.根据权利要求3所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶与稳定剂的重量比为1∶3～5。

5.根据权利要求2所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述酶标检测抗体稀释液由200mL小牛血清加800mL 0.02mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液加1mL Proclin300，混匀后制成。

6.根据权利要求1所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述Annexin A3标准品S0～S5分别为纯的标准品稀释液以及将人Annexin A3重组蛋白溶液用标准品稀释液稀释配成0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL、0.8ng/mL、1.6ng/mL。

7.根据权利要求6所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述标准品稀释液由称取10gBSA加入1000mL 0.02mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液中溶解，加入1mLProclin300，混匀后制成。

8.根据权利要求1所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述化学发光底物液A由称取Tris 6.057g，加500mL去离子水溶解，加入浓HCL3.808mL，30％过氧化氢0.675mL，用去离子水定容至1000mL制成，所述化学发光底物液B由称取Tris 6.057g，加500mL去离子水溶解，加入浓HCL1.033mL，加入鲁米诺708.8mg，用去离子水定容至1000mL制成。

9.根据权利要求1所述的一种卵巢癌Annexin A3检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液由称取Na₂HPO₄·12H₂O 14.506g，NaH₂PO₄·12H₂O1.482g，NaCl 150g，加去离子水1000mL溶解，加Tween-20 10mL、Proclin300 1mL，使用前用去离子水1∶20稀释。