[发明专利]3D数字PCR检测EGFR特定基因突变的引物探针组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种3D数字PCR检测EGFR特定基因突变的装置，其特征在于，所述装置用于执行以下方法包括：

利用试剂盒配制每个突变位点的PCR反应体系；

将各所述突变位点的PCR反应体系加样至数字PCR芯片中；

将所述数字PCR芯片放入数字PCR仪中进行PCR扩增，得到扩增结果；

将得到所述扩增结果的所述数字PCR芯片放到芯片扫描仪中进行荧光信号扫描，根据所述荧光信号判读所述EGFR特定基因的突变结果；

所述试剂盒包括3D数字PCR检测EGFR特定基因突变的引物探针组合物，所述引物探针组合物包括：检测EGFR基因19～21号外显子特定突变的引物及探针，所述突变为EGFRT790M、EGFR L858R、EGFR 2235_2249del15和EGFR 2236_2250del15；所述检测EGFR基因19～21号外显子突变的引物及探针如下表1所示：

表1：

；

每个突变位点的PCR反应体系中，野生探针携带VIC信号，突变探针携带FAM信号，所述荧光信号扫描的结果中，扩增结果的二维图分为FAM(+)VIC(-)区、FAM(+)VIC(+)区、FAM(-)VIC(-)区以及FAM(-)VIC(+)区四个象限，将阳性对照在FAM(+)VIC(-)区的成簇突变点的FAM最小荧光值记为P，根据所述荧光信号判读所述EGFR特定基因的突变结果的步骤包括：

若待测样本位于FAM(+)VIC(-)区，且所述待测样本的FAM荧光值≥P的突变点的数目≥3，则判定所述待测样本为阳性样本；

若待测样本位于FAM(+)VIC(-)区，且所述待测样本的FAM荧光值≥P的突变点的数目3，则判定所述待测样本为阴性样本或低于检测限。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述试剂盒中扩增每个突变位点的引物及探针以引物探针混合液的形式存在。

3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品；所述阳性质控品为含有所述EGFR基因突变的DNA与野生型DNA的混合液。

4.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述试剂盒还包括QuantStudio 3D数字PCR预混液，所述预混液包括dNTPs、Taq酶及PCR缓冲液。