[发明专利]注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的质控方法及质控标准

权利要求书

1.一种检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，所述方法以非疾病的诊断为目的，其特征在于，其包括：

采用MTT法检测注射用骨肽对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的抑制活性；

采用量反应平行线法，评估所述注射用骨肽对所述类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的生物效价、可信限率。

2.根据权利要求1所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，采用MTT法检测注射用骨肽对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的抑制活性的方法包括：

取对数生长期的类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞，胰蛋白酶消化后，调整细胞悬液浓度为1×10⁵~1×10⁶个/mL，接种；

在接种后的所述细胞悬液中加入浓度为3~6g/L的注射用骨肽溶液，培养45~50 h。

3.根据权利要求2所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，所述对数生长期的类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的培养方法包括：将类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞培养于含7~13%的胎牛血清、80~120 U•mL^-1抗生素的培养液中。

4.根据权利要求2所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，采用MTT法检测注射用骨肽对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的抑制活性的方法还包括：将所述细胞悬液与所述注射用骨肽溶液混合培养结束后的培养液，与MTT溶液混合，染色3~5h后，检测波长为480~500nm处吸光度值。

5.根据权利要求1-4任一项所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，其包括：注射用骨肽对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞的生物效价在88~109U•mL^-1，可信限率小于10%为合格。

6.一种检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，所述方法以非疾病的诊断为目的，其包括：

采用CCK-8法检测所述注射用骨肽对单核巨噬细胞的抑制活性；以及

采用量反应平行线法，评估所述注射用骨肽对所述单核巨噬细胞的生物效价、可信限率。

7.根据权利要求6所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，采用CCK-8法检测所述注射用骨肽对单核巨噬细胞的抑制活性包括：

取对数生长期的单核巨噬细胞，胰蛋白酶消化后，调整细胞悬液浓度为4×10⁵~4×10⁶个/mL，接种；

在接种后的所述细胞悬液中加入浓度为2~4g/L的注射用骨肽溶液，培养20~30 h。

8.根据权利要求7所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其特征在于，所述对数生长期的单核巨噬细胞的培养方法包括：将单核巨噬细胞培养于含7~13%的胎牛血清、80~120 U•mL^-1抗生素的培养液中。

9.根据权利要求7所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的质控方法，其特征在于，将所述细胞悬液与所述注射用骨肽溶液混合培养结束后的培养液，与CCK-8溶液混合，染色1~1.5h后，检测波长为440~460nm和620~640nm处吸光度值。

10.根据权利要求6-9任一项所述的检测注射用骨肽对类风湿关节炎的生物活性的方法，其包括：注射用骨肽对单核巨噬细胞的生物效价在67~115U•mL^-1，可信限率小于20%为合格。