[发明专利]一种食用油中多环芳烃的液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种食用油中多环芳烃的液相色谱检测方法。

背景技术

多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons PAHs) 是指两个以上苯环以稠环形式相连的化合物，是重要的环境和食品污染物。目前已发现的200多种多环芳烃中具有致癌作用的多为四到六环的重质多环芳烃。国际癌研究中心（IARC）（1976年）列出的94种对实验动物致癌的化合物。其中15种属于多环芳烃，由于苯并[a]芘是第一个被发现的环境化学致癌物，而且致癌性很强，故常以苯并[a]芘作为多环芳的代表，它占全部致癌性多环芳烃1%-20%。多环芳烃广泛分布于环境中,可以在我们生活的每一个角落发现,任何有有机物加工、废弃、燃烧或使用的地方都有可能产生多环芳烃。

相关限量要求：《GB 2716-2005食用植物油卫生标准》、《GB 2762-2017 食品安全国家标准 食品中污染物限量》中均规定食用油中苯并[a]芘含量≤10μg/kg。2017.04月国家粮食局发起“中国好粮油行动计划”，并于2017.09.15发布《LS/T 3249—2017 中国好粮油 食用植物油》行业标准，将多环芳烃（苯并[a]芘、苯并[a]蒽、苯并[b]荧蒽、屈的总和）列为食用植物油声称指标。

目前文献中常见的多环芳烃检测多采用佛罗里硅土或多环芳烃专用柱，样液上柱后经试剂淋洗净化后，再进行洗脱，收集流出液进行检测。该方式最大缺点是萘、苊、芴、菲等极性较强的化合物SPE柱对其保留性较差，回收率很低甚至无回收。

发明内容

本发明克服了以上缺点，提供了一种食用油中多环芳烃的液相色谱检测方法，该方法高效、稳定、回收率较高，检测设备普及率高。

本发明一种食用油中多环芳烃的液相色谱检测方法的目的是这样实现的，其特点在于具体包括如下步骤：

1）提取：称取2g样品于50ml洁净的离心管中，加入2ml乙腈饱和的正己烷溶解食用油，再加入20ml正己烷饱和的乙腈提取，振荡3min，0℃冷冻5min后离心，转移乙腈层至100ml茄型瓶中，残留的混合层用20ml正己烷饱和的乙腈重复上述提取步骤，合并乙腈层至茄型瓶中，得到提取液。

2）减压浓缩：将步骤1）所得提取液在40℃水浴环境减压浓缩至2ml左右，得到浓缩液。

3）SPE净化：将步骤2）所得浓缩液转入预先用6ml乙腈淋洗的C18净化柱，收集流出液于带刻度玻璃管中，用2+2ml乙腈分两次洗涤茄形瓶，洗涤液也转入C18净化柱中，合并流出液至玻璃管中，得到淋洗液。

4）氮吹浓缩：将步骤3）所得淋洗液在温度＜40℃环境氮吹浓缩至＜1ml，得到浓缩液。

5）定容：将步骤4）所得浓缩液用乙腈定容至1ml，并过0.2μm针筒式滤膜于进样瓶中，得到待检溶液。

6）检测分析：将步骤5）所得待检溶液用HPLC分析检测。

本发明用高效液相色谱法检测食用油中的多环芳烃，作以下改进：

进一步地，步骤1）其中食用油与乙腈饱和正己烷的总用量之比为2g:1~2.5ml ，优选2g:2ml。溶解后混合溶液的密度稍大于正己烷饱和的乙腈，离心后乙腈层在上层，方便移取。

进一步地，步骤1）中所述分别用正己烷和乙腈互相饱和的溶剂作溶解和提取试剂，使正己烷与油混合层的体积保持不变，减少乙腈对正己烷的溶解，保持良好的分散体系。另外离心前在0℃冷冻5min，降低食用油在乙腈中的溶解度。

进一步地，步骤2）提取液减压浓缩至近干，约1~3ml，优选2ml左右。若剩余溶液过多，在SPE柱净化时易将净化柱上保留的油脂洗脱，导致净化效果变差。

进一步地，步骤3） SPE净化柱需要提前用6ml乙腈预淋洗，去除柱管上可能存在的污染。SPE净化柱可选用C18或者中性氧化铝，净化效果基本相当，优选C18净化柱。

进一步地，步骤6）同时检测15种多环芳烃，单一波长无法实现较好的灵敏度，因此需针对不同的多环芳烃出峰时间分段波长检测。

本发明作为一种优选方案，液相色谱的检测条件包括：

色谱条件：

色谱柱：Eclipse PAH （5μm，4.6×250mm）反相色谱柱；

柱温：30℃；

进样体积：20μl；

流动相：A 水，B 乙腈；

流动相梯度：

波长分段参数：

附图说明