[发明专利]一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法

说明书

技术领域

本发明属于食用真菌液体深层发酵技术领域，具体涉及一种发酵生产香菇的补料培养基和应用该补料培养基进行香菇液体深层连续培养的方法。

背景技术

香菇多糖(Lentinan)(分子式：(C₆H₁₀O₅)_n)是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、抗感染、抗病毒、抗氧化、延缓衰老、保护肝脏等作用，主要应用于医药和保健品领域。香菇多糖能增强体液免疫和细胞免疫功能，可对抗流感病毒，是一种有待开发的抗流感保健食品。

香菇多糖的生产包括从天然或人工培养的香菇子实体中提取和从发酵培养的菌丝体和发酵液中提取两种方式。采用液体发酵技术生产菌丝体具有周期短、成本低、产量大，且有工业化生产前景等优势，是香菇多糖的主要生产方法。

目前现有的香菇液体发酵都是采用分批发酵的形式。分批发酵又称为分批培养，是指在一个密闭系统内投入有限数量的营养物质后，接入少量的微生物菌种进行培养，使微生物生长繁殖，在特定的条件下只完成一个生长周期的微生物培养方法。分批发酵的优点在于：对发酵条件要求宽泛，不用特意区分菌种类型，对不同菌种类型均可采用类似的方式进行发酵。

分批发酵虽然能够有效获得香菇菌丝体，进而提取香菇多糖。但香菇作为食用真菌，其与单细胞细菌相比，具有培养过程中延迟期长，指数生长期增长缓慢呈算术级增长的特点。因此，香菇液体分批发酵容易呈现出粘度大，贴壁生长，不耐受剪切等技术问题，从而导致香菇液体分批发酵生产效率低下。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种香菇发酵用补料培养基，其特征在于，按重量百分比计，包括4-6％的葡萄糖、0.5-1％的多聚蛋白胨、0.5-1％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙、0.3-0.5％的豆油、0.01-0.03％的吐温80、0.05-0.15％的醋酸和91-93％水。

优选的，所述的补料培养基按重量百分比计，还包括0.5-1.5％的木质素。

本发明还提供了一种香菇液体深层连续培养方法，包括如下步骤：

在液体发酵培养基中接种香菇种子液，在22-28℃条件下恒温发酵培养，所述发酵的过程中控制发酵液的溶氧不低于25％，pH值为3.5～4.0；

发酵8-12天后，以稀释率为0.01-0.04/h的补料速率向发酵液中加入权利要求1或2所述的补料培养基，继续连续发酵培养。

优选的，所述香菇种子液的制备方法包括如下步骤：

(1)以孢子液接种法在液体发酵培养基中接种香菇孢子，活化培养8-12天后，得活化菌种；

(2)以火焰接种的方法在液体发酵培养基中接种所述活化菌种，扩繁培养4-6天后，得香菇种子液。

优选的，所述液体发酵培养基按重量百分比计，独立包括4-6％的葡萄糖、0.2-0.3％的多聚蛋白胨、0.2-0.3％的酵母浸粉、0.1-0.3％的磷酸二氢钾、0.05-0.15％的硫酸镁、0.05-0.15％的氯化钙和93-95％水。

优选的，发酵过程中向发酵液中通入无菌空气，所述无菌空气的通气比为0.4-0.6vvm。

优选的，发酵过程中对发酵液进行搅拌，搅拌的初始速度为120-180rpm。

优选的，所述发酵过程中发酵液的pH用质量体积浓度为15～25％的氢氧化钠溶液调节。

优选的，所述液体发酵培养基和/或补料培养基经过灭菌处理；所述灭菌的条件独立为：温度120-122℃、压力103-115kpa；所述灭菌的时间独立为40-60min。

优选的，所述香菇种子液的接种量为0.5-2％。

有益效果：

本发明提供了一种香菇发酵用补料培养基，该补料培养基营养全面均衡，可有效延长香菇指数生长期，提高香菇液体深层培养效率及生物量，提高香菇多糖产率。将所述补料培养基进行香菇的液体深层连续发酵，可有效缩短香菇发酵的延迟期，延长香菇指数生长期至20天，提高香菇液体深层培养生物量72g/L，提高香菇多糖产量至10.8g/L。