[发明专利]一种桔小实蝇卵的显微注射方法

说明书

技术领域

本发明属于病虫防害领域，具体地是涉及一种桔小实蝇卵的显微注射方法

背景技术

桔小实蝇(Bactroceradorsalis)是危害水果和蔬菜的危险性有害生物，我国于1911年首次在台湾省台北市的柑桔园发现，在大陆于1937年报道有该虫发生。鉴于该虫寄主范围广，繁殖快及对水果贸易造成的严重危害，许多国家将其列为检疫对象。利用环境友好型防治方法防治害虫是当今害虫防治的趋势。实现桔小实蝇的规模化饲养，有利于开发环保型防控技术，如不育昆虫技术(sterile insect technique,SIT)和利用天敌昆虫(如寄生蜂)防治害虫。

桔小实蝇的规模化饲养中，现有用显微注射桔小实蝇卵的方法如下：

用新鲜橙子扎洞诱导桔小实蝇产卵1h，剥开橙子挑取已产桔小实蝇卵。

在解剖镜下用毛笔将桔小实蝇卵排序，转移桔小实蝇卵到贴在有双面胶的玻片上，轻轻按压；将桔小实蝇卵在干燥剂中干燥30min左右。随后用水饱和油覆盖去壳卵表面，防止进一步干燥。

显微注射完毕，将注射过的桔小实蝇卵挑到预先保温的幼虫食物中；培养7d后，将幼虫挑取到湿润沙子中，让其自然成蛹；蛹培养7d后，将蛹从沙中轻轻筛出，置于饲养笼中，等待蛹羽化成蝇。

上述这种显微注射方法，存在以下缺陷：

由于桔小实蝇卵有外壳包裹，很难干燥，同时卵的内压很大，显微注射过程中容易喷出胞浆，爆裂。

此外，由于新鲜橙子存在季节性，这为采卵增加了很大的局限；桔小实蝇卵呈乳白色，剥开橙子挑卵很容易和果肉混淆。

发明内容

本发明的目的之一提供一种新的桔小实蝇卵的显微注射方法，该方法解决了桔小实蝇卵在显微注射中难以干燥和内压过大的问题。

实现上述目的的技术方案如下。

一种桔小实蝇卵的显微注射方法，包括以下步骤：

(B1)用将放有桔小实蝇卵的黑色纱布固定在离心管的管口，倒扣离心管将桔小实蝇卵在体积浓度1.5-2％的次氯酸钠溶液中浸泡，轻轻晃动离心管使桔小实蝇卵充分接触次氯酸钠溶液；

(B2)将处理过的去壳卵用纯水洗涤，期间轻轻晃动，将次氯酸钠溶液尽量洗涤干净；将处理好的去壳卵挑取到覆盖湿润滤纸的培养皿中；

(B3)先准备好粘着有双面胶的玻片；在解剖镜下将桔小实蝇去壳卵依序横向排序在厚滤纸上，翻转粘着双面胶的玻片，将排列好的桔小实蝇去壳卵转移到双面胶上，用镊子的背部轻轻滑过玻片，从而转移桔小实蝇去壳卵到玻片上，并将去壳卵在干燥剂中干燥8-12min，随后用水饱和油覆盖去壳卵表面，防止进一步干燥；

(B4)进行显微注射，完毕，保留注射过的桔小实蝇去壳卵，既得显微注射的桔小实蝇卵。

优选地，还包括保持覆盖卵的水饱和油充足，将玻片放置在有湿润滤纸的培养皿中，置于桔小实蝇孵化环境中。

优选地，步骤(B1)中，将桔小实蝇卵在体积浓度1.5-2％的次氯酸钠溶液中浸泡1-2min，轻轻晃动离心管使桔小实蝇卵充分接触次氯酸钠溶液。更优选地，所述次氯酸钠的浓度为1.8％

优选地，步骤(B2)中，用纯水洗涤去壳卵5-7次，转移桔小实蝇去壳卵到贴有双面胶的玻片上，将去壳卵在干燥剂中干燥8-12min。

优选地，所述放有桔小实蝇卵的黑色纱布中的桔小实蝇卵，是通过以下方法采集得到的，所述方法包括以下步骤：

在管壁打孔(打孔距离2公分左右)的离心管中加入10ml橙汁(美汁源的果粒橙，过滤掉果粒)，不断摇晃使橙汁充分接触离心管内壁然后将其放入能产卵的桔小实蝇饲养笼中，放置15-35min，桔小实蝇在离心管产卵，得到产卵管；

取出产卵管，用清水冲洗将离心管内壁的卵收集到黑色纱布上。

优选地，所述离心管为25-100ml，更优选为，离心管为50ml。

优选地，放置时间为20-30min。

本发明用次氯酸钠溶液将桔小实蝇外壳去掉，解决了桔小实蝇卵在显微注射中难以干燥和内压过大的问题。在用桔小实蝇未去壳的卵注射，卵孵化率仅有1％-5％，感染率1％-9％；本发明通过一系列的改进，提高注射后卵孵化率达10％-30％，感染率达15％-50％。

其次，本发明采用离心管和橙汁收集桔小实蝇卵，避免了新鲜橙子的季节性以及富集的困难性，并且缩短了产卵时间，保证了蚊卵的新鲜度和同步性。采用该方法，容易采集到桔小实蝇卵，且为后续的显微操作提供了方便。

具体实施方式