[发明专利]一种检测和评价抗HBV药物活性的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测和评价抗HBV药物活性的方法，包括如下步骤：

S1、向动物肝癌细胞或人肝癌细胞的培养体系中加入待测抗HBV药物，进行培养，

S2、检测培养上清液中HBV pgRNA浓度，

S3、根据培养上清液中HBV pgRNA浓度判断待测抗HBV药物活性结果；

所述判断待测抗HBV药物活性结果的标准为：

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在500copies/mL以下时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性较好，

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在1.0×10⁵copies/mL以上时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性较差，

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在500～1.0×10⁵copies/mL之间时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性中等；

所述HBV pgRNA浓度使用实时荧光定量PCR方法测定，所述实时荧光定量PCR方法使用的上、下游引物和荧光标记探针的序列如下：

上游引物的序列为：序列表序列1；

下游引物的序列为：序列表序列2；

荧光标记探针的序列为：序列表序列3。

2.一种检测和评价抗HBV药物活性的方法，包括如下步骤：对经待测抗HBV药物治疗过的转HBV基因动物的离体血清进行HBV pgRNA浓度测定，根据离体血清中HBV pgRNA浓度判断待测抗HBV药物活性结果；

所述判断待测抗HBV药物活性结果的标准为：

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在500copies/mL以下时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性较好，

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在1.0×10⁵copies/mL以上时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性较差，

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在500～1.0×10⁵copies/mL之间时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性中等；

所述HBV pgRNA浓度使用实时荧光定量PCR方法测定，所述实时荧光定量PCR方法使用的上、下游引物和荧光标记探针的序列如下：

上游引物的序列为：序列表序列1；

下游引物的序列为：序列表序列2；

荧光标记探针的序列为：序列表序列3。

3.一种检测和评价抗HBV药物活性的方法，包括如下步骤：对经待测抗HBV药物治疗过的乙肝患者的离体血清进行HBV pgRNA浓度测定，根据离体血清中HBV pgRNA浓度判断待测抗HBV药物活性结果；

所述判断待测抗HBV药物活性结果的标准为：

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在500copies/mL以下时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性较好，

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在1.0×10⁵copies/mL以上时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性较差，

当培养上清液或离体血清中HBV pgRNA浓度在500～1.0×10⁵copies/mL之间时，所述待测抗HBV药物的活性或敏感性中等；

所述HBV pgRNA浓度使用实时荧光定量PCR方法测定，所述实时荧光定量PCR方法使用的上、下游引物和荧光标记探针的序列如下：

上游引物的序列为：序列表序列1；

下游引物的序列为：序列表序列2；

荧光标记探针的序列为：序列表序列3。

4.如权利要求1-3任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR方法使用的逆转录引物的序列为：序列表序列4。

5.如权利要求1所述的方法，特征在于：所述人肝癌细胞来自人类肝癌细胞系HepG2 .2.15。

6.权利要求1—5中任一所述方法在生产或筛选抗HBV药物中的应用。