[发明专利]一种防治马铃薯枯萎病的菌株及其制剂的制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710862006.3 | 申请日： | 2017-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN107603906B | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 唐广辉;赵钢勇;顾欣燕;孙海远;闫辉敏 | 申请（专利权）人： | 天津坤禾生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/125 |
| 代理公司： | 天津市尚文知识产权代理有限公司 12222 | 代理人： | 张东浩 |
| 地址： | 300457 天津市滨海新区天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菌株 马铃薯 枯草芽孢杆菌 枯萎病 制备 制备方法和应用 保藏 镰刀菌 施用 防治 致病菌 串珠镰刀菌 二级种子液 发酵罐发酵 发明微生物 尖孢镰刀菌 雪腐镰刀菌 燕麦镰刀菌 一级种子液 菌种活化 镰刀菌属 生态环境 液体制剂 抑制生长 接骨木 无残留 出料 菌剂 药害 增产 | ||
1.一种防治马铃薯枯萎病的菌株，其特征是：该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)MES810，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2017年8月10日，保藏编号为CGMCCNo.14514。
2.根据权利要求1所述的防治马铃薯枯萎病的菌株对应的制剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)菌种活化：在250mL锥形瓶中装入50mL无菌水，挑取斜面菌种于锥形瓶中，摇匀，取1-2mL液体至500mL克氏瓶中，克氏瓶中事先装入100mL牛肉膏蛋白胨培养基，116℃-121℃湿热灭菌20-35min，将克氏瓶置于32℃-36℃条件下培养24-36h，得活化菌种；
(2)一级种子液的制备：将以上盛有活化菌种的克氏瓶取出，倒入50-100mL无菌水，刮取菌胎制成菌悬液，将其全部倒入装有100-300mL且温度为4℃的无菌水的种子瓶中，得一级种子液；
(3)二级种子液的制备：在300L发酵罐中装有150L二级种子培养基，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在30℃-38℃培养12-24h；得到二级种子培养液；
(4)发酵罐发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的枯草芽孢杆菌发酵培养基，115℃-122℃湿热灭菌20-40min，将150L或200L二级种子液全部接种于枯草芽抱杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.02MPa-0.07MPa，在30℃-38℃培养24-36h后，出料得到防治马铃薯枯萎病的发酵液制剂；
所述牛肉膏蛋白胨培养基具体为，按质量分数计：牛肉膏0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，氯化钠0.2-1％，营养琼脂1.5％-2.0％，余量为水，培养基pH为6.0-7.5；
所述二级种子培养基的成分为，按质量分数计：葡萄糖0.3％-2％，玉米粉1％-5％，豆粕粉1％-5％，磷酸氢二钠0.1‰-0.5‰，磷酸二氢钠0.5‰-5‰，消泡剂0.2‰-2‰，余量为水，培养基pH调为6.0-7.5，并在115℃-122℃湿热灭菌20-40min备用；
所述发酵培养基的成分为，按质量分数计：葡萄糖0.3％-2％，玉米粉1％-5％，豆粕粉1％-5％，磷酸氢二钠0.1‰-0.5‰，磷酸二氢钠0.5‰-5‰，消泡剂0.2‰-2‰，余量为水，培养基的pH调为6.0-7.5，并在115℃-122℃湿热灭菌20-40min。
3.根据权利要求2所述的防治马铃薯枯萎病制剂的制备方法制备的制剂的使用方法，其特征在于，将马铃薯枯萎病的发酵液制剂稀释100-300倍，然后按照5kg/亩用量与基肥一同施入土壤中后，开始种植马铃薯。
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