[发明专利]一种检测CA24-2的诊断试剂盒及其制备方法

说明书

本发明的一种检测CA24‑2的诊断试剂盒采用双抗体夹心法的免疫吸附试验原理，结合时间分辨免疫荧光技术定量检测糖类抗原24‑2；可以用于消化道恶性肿瘤的辅助诊断和治疗效果的监测；同时本发明的试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性优异、可测定范围宽、检测自动化程度高和无环境污染等优点。

技术领域

本发明涉及肿瘤癌抗原免疫分析技术领域，尤其涉及一种检测糖类抗原24-2的诊断试剂盒及其制备方法。

背景技术

糖类抗原24-2(CA24-2)是一种唾液酸化的鞘糖脂类肿瘤相关抗原，CA24-2检测对于消化道恶性肿瘤有较高的诊断价值，特别是对胰腺癌、结直肠癌具有较高阳性率。CA24-2常用于治疗后的跟踪监控，当CA24-2持续升高时，提示肿瘤可能有残留或者转移。某些良性阻塞性黄疸以及肝实质性损害患者也会出现CA24-2的升高。

目前检测CA24-2的方法主要有：酶免ELISA法和化学发光CLIA法。酶免ELISA法的优点是操作简单、不需要复杂的仪器、只需要进行简单的培训即可进行操作，但是由于平台所限，其灵敏度相对较低，测定范围相对较窄，而且一般检测窗口期较长。化学发光CLIA法优点是灵敏度、特异性较高，检测范围较宽；缺点是由于大多数板式CLIA试剂盒仍采用EIA相同的酶促反应，以辣根酶或碱性磷酸酶交联抗体，使用鲁米诺或金刚烷等作为底物，检测的是动态发光，导致检测信号值衰减较快、高浓度和低浓度信号衰减速度不一致，限制了其在免疫定量分析中的低端检测灵敏度、稳定性和重复性。

发明内容

本发明为解决现有技术中的上述问题提出的一种兼具灵敏度高、特异性强、稳定性好、可测定范围宽、试剂有效期长、操作简单等优势的检测CA24-2的时间分辨免疫荧光诊断试剂盒及其制备方法。

为了实现本发明的上述目的，本发明所采取的技术方案为：

一种检测CA24-2的诊断试剂盒，包括包被反应板，还包括镧系元素离子标记的抗CA24-2单抗；所述包被反应板为吸附有抗CA24-2单抗的微孔板。

为了优化上述技术方案，本发明采取的技术措施还包括：

进一步地，本发明的检测CA24-2的诊断试剂盒还包括校准品、缓冲液、洗涤液、荧光增强液。

优选地，本发明中所述镧系元素离子为Eu³⁺、Tb³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺中的至少一种，更优选为为Eu³⁺。

优选地，本发明使用的荧光增强液含有β-二酮类化合物或芳香胺类化合物。

另一方面，本发明还提供制备上述检测CA24-2的诊断试剂盒的方法，包括下述步骤：

步骤1：制备预处理包被反应板

使用黑色聚苯乙烯制备板架，预留与酶标板相互配合的通孔；酶标板经过钴60辐照30天后，与板架配合组装，获得预处理包被反应板，备用；

步骤2：包被板的获得

用碳酸盐缓冲液将抗CA24-2单抗稀释至1-4μg/mL，以100μL/孔包被过夜，然后洗涤、封闭、干燥，将微孔板真空密封于铝箔袋内，冷藏备用；

步骤3：制备镧系元素离子标记的抗CA24-2单抗

抗CA24-2单抗经碳酸盐缓冲液透析后，与镧系元素离子按2:1比例混合，静置24-48小时，用Sephadex S-200分离柱纯化，得到镧系元素离子标记的抗CA24-2单抗，用保存液将上述镧系元素离子标记的抗CA24-2单抗保存备用；

步骤4：荧光增强液的配制