[发明专利]一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法

说明书

本发明公开了一种健骨注射液HPLC指纹图谱构建及其质量检测方法。该方法以夏佛塔苷、维采宁‑2和维采宁‑3为对照品，在色谱条件为：乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；洗脱时间0‑70min，对应流动相A变化为：10‑20％A，流动相B为90‑80％；柱温30℃；检测波长340nm的情况下，进行高效液相色谱分析，构建指纹图谱。再通过十批次以上的健骨注射液样品构建共有模式指纹图谱，并与待测样品对比，检测健骨注射液的质量。本发明方法能对健骨注射成品或半成品的质量进行监控；为健骨注射液的标准化研究提供了科学依据。该方法的重复性、精密性和专属性强。

技术领域

本发明涉及健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法。

背景技术

马鞭草科植物黄毛豆腐柴(Premna fulva craib)系广西壮族民间药，其商品药材名为“战骨”。健骨注射液收录于1997年版《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》，由战骨制成。中药理论认为，战骨强筋健骨。其制成的注射液具有活血散瘀，强筋健骨，驱风止痛的功效，用于脊椎骨质增生症，证见关节疼痛僵硬，或关节红肿，肢体无力，或局部发麻等。但目前还没有建立标准健骨注射液的指纹图谱质量检测方法。

发明内容

本发明提供一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，并进一步公开了健骨注射液标准HPLC指纹图谱的构建方法及其质量检测方法。

一种健骨注射液HPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

1、供试品溶液的制备：取本品，加20％乙腈，制成按体积比计浓度为10％的供试品溶液；

2、对照品溶液的制备：分别取夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含100-200μg夏佛塔苷、150-250μg维采宁-2、50-100μg维采宁-3的混合对照品溶液；

3、高效液相色谱法分析，记录指纹图谱，即得：色谱条件为进样量10μl；色谱柱为WelchUltimate XB-C18；以乙腈为流动相A，0.3％冰乙酸溶液为流动相B；梯度洗脱，洗脱时间0-70min，对应流动相A变化为：10-20％A，流动相B为90-80％；柱温30℃；检测波长340nm。

对照品夏佛塔苷、维采宁-2和维采宁-3的浓度依次优选150μg/ml，230μg/ml，70μg/ml。

健骨注射液HPLC标准指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

1、共有模式图谱的生成：按权利要求1所述的方法，得十批次以上的健骨注射液样品HPLC指纹图谱，将图谱导入指纹图谱分析软件，生成共有模式指纹图谱；

2、共有峰的确认：对共有模式指纹图谱主要峰进行确认，确定共有特征峰7个，依次为1号峰为维采宁-2、3号峰为夏佛塔苷、4号峰为维采宁-3，2号峰、5号峰、6号峰、7号为芹菜素糖苷类化合物；确认共有峰的共有模式指纹图谱及为所述的标准指纹图谱。

所述的共有峰的确认方法具体为：UFLC-TRIPLE TOF-DAD-MS/MS技术手段对主要峰进行色谱峰归属及峰纯度检测及确认；

质谱工作参数为：ion spray voltage 1500V；ion source gas 150psi；ionsource gas260psi；temperature 550℃；curtain gas 15psi；collision gas pressure8psi；entrance potential 10V；采用ESI电喷雾离子源，负离子模式进行检测。

健骨注射液的质量检测方法，则包括以下步骤：

1、按如上健骨注射液HPLC指纹图谱构建方法，建立健骨注射液待测样品指纹图谱；